河南农业科学 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (8): 136-139.

• 畜牧·兽医 • 上一篇    下一篇

抗鹅α-干扰素单链抗体基因扩增与表达

姚志兰1,邓祖丽颖2,傅宏庆1,黄 平3,江明香4,刘永鑫5,王永娟1*   

  1. 1.江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏 泰州 225300; 2.郑州幼儿师范学校,河南   郑州 450000;   3.湖州市安吉县畜牧兽医局,浙江 安吉   313000;4.安吉以琳生物科技有限公司,浙江 湖州 313000; 5.阜宁县鑫永生态饲养场, 江苏 阜宁   224400
  • 收稿日期:2016-02-20 出版日期:2016-08-15 发布日期:2016-08-15
  • 通讯作者: 王永娟(1980-),女,江苏海门人,副教授,博士,主要从事动物传染病防治研究。E-mail:43088591@qq.com
  • 作者简介:姚志兰(1979-),女,江苏泰兴人,兽医师,硕士,主要从事动物传染病防治研究。E-mail:1318575080@qq.com
  • 基金资助:
    江苏省“六大人才”高峰第十二批培养对象支助项目(10410015002);江苏省农业科技支撑计划(BE2014380);江苏农牧科技学院“凤凰人才工程”项目;江苏农牧科技职业学院重点支持项目(NSFZD1405,NSFPT201510,NSFPT201512)

  • Received:2016-02-20 Published:2016-08-15 Online:2016-08-15

摘要: 为制备抗鹅α-干扰素的单链抗体,以抗鹅α-干扰素的杂交瘤细胞株总RNA为模板,RT-PCR 法扩增鹅α-干扰素的抗体轻、重链基因,再采用SOE-PCR法,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3为接头,组装出完整的鹅α-干扰素的单链抗体可变区片段(ScFv)基因,并将ScFv基因克隆到pGEMT-Easy载体中进行测序分析,将测序正确的ScFv基因片段克隆入pET-30a载体中进行诱导表达。结果显示,成功组装了ScFv基因,其全长为726 bp,为VH- Linker-VL 结构,其中VH 长357 bp、VL长324 bp,成功表达了ScFv蛋白,大小为 27 ku。

关键词:  , 鹅,  , &alpha, -干扰素,  , 单链抗体,  , 测序,  , 表达