河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (11): 126-131.

• 畜牧 兽医 • 上一篇    下一篇

 5-Aza-dC 对奶牛乳腺上皮细胞PPARγ表达的影响

边艳杰,王 杰,王春梅,李庆章*   

  1. 东北农业大学,黑龙江 哈尔滨 150030
  • 收稿日期:2014-06-26 出版日期:2014-11-15 发布日期:2014-11-15
  • 通讯作者: 李庆章(1953-),男,河北保定人,教授,博士,主要从事泌乳生物学及乳腺功能调控。E-mail:qzli@neau.edu.cn
  • 作者简介:边艳杰(1985-),女,河南周口人,博士,主要从事泌乳生物学及乳腺功能调控。E-mail:bianjie.033@163.com
  • 基金资助:
     
    国家重点基础研究发展 (973)计划 (2011CB100804)

  • Received:2014-06-26 Published:2014-11-15 Online:2014-11-15

摘要: 为阐明DNA甲基化对奶牛乳腺泌乳功能调控的机制,研究了甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对奶牛乳腺上皮细胞中PPARγ基因启动子甲基化状态及其表达的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L的5-Aza-dC对奶牛乳腺上皮细胞进行处理,用EpiQuikTMDNA methyltransferase assay试剂盒进行甲基转移酶活性检测,采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力,利用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术检测了PPARγ启动子的甲基化特征,qRT-PCR法检测PPARγmRNA表达的变化,Western blot检测PPARγ蛋白表达的变化。结果显示:与空白对照组相比,0.1μmol/L的5-Aza-dC对奶牛乳腺细胞生长无毒性,处理96h甲基转移酶活性极显著降低,奶牛乳腺细胞的PPARγ基因启动子甲基化程度降低,PPARγ表达升高。表明5-Aza-dC可降低奶牛乳腺细胞中PPARγ启动子区域的甲基化程度,促进PPARγ表达。

关键词: 5&ndash, 氮杂&ndash, 2'&ndash, 脱氧胞苷, 奶牛乳腺上皮细胞, PPAR&gamma, 基因, DNA甲基化