非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.017

河南农业科学 ›› 2020, Vol. 49 ›› Issue (10): 124-129.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.017

所属专题：非洲猪瘟专题

非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用

郝丽影¹，王彦伟²，孙玉洁²，曹红梅¹，黄甜¹，逄文强²，李向东²，邓均华¹，田克恭^1,2

（1.洛阳普泰生物技术有限公司，河南洛阳 471000；2.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471000）

收稿日期:2020-04-13 出版日期:2020-10-15 发布日期:2020-10-15
通讯作者: 邓均华（1978-），女，四川阆中人，兽医师，硕士，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。E-mail：dengbetter88@163.com 田克恭（1964-），男，山西万荣人，研究员，博士，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。E-mail：vetvac@126.com
作者简介:郝丽影（1987-），女，河南巩义人，兽医师，硕士，主要从事兽用诊断试剂研究。E-mail：HaoLY0717@163.com 王彦伟为同等贡献作者
基金资助:
郑洛新国家自主创新示范区创新引领型产业集群项目（181200211700）；洛阳市重大科技专项；国家“万人计划”青年拔尖人才项目

Preparation and Application of Monoclonal Antibodies against P30 Protein of African Swine Fever Virus

HAO Liying¹,WANG Yanwei²,SUN Yujie²,CAO Hongmei¹,HUANG Tian¹,PANG Wenqiang²,LI Xiangdong²,DENG Junhua¹,TIAN Kegong^1,2

(1.Luoyang Putai Bio-Tech Co. ,Ltd. ,Luoyang 471000,China;2.National Research Center for Veterinary Medicine,Luoyang 471000,China)

Received:2020-04-13 Published:2020-10-15 Online:2020-10-15

摘要/Abstract

摘要： 为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫学诊断试剂，利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白，制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体，建立检测ASFV的胶体金免疫层析法（GICA）。结果显示，成功构建了重组表达质粒pET28a-P30，实现了重组P30蛋白的可溶性表达，且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应；制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，腹水ELISA效价均高于1∶40 000，与ASFV具有良好的反应性，且不与其他常见猪源病毒反应；利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法，可用于ASFV的检测。

关键词: 非洲猪瘟病毒, P30蛋白, 大肠杆菌表达系统, 单克隆抗体, 胶体金免疫层析法

Abstract: In order to develop ASFV immunodiagnostic reagents,recombinant P30 protein of ASFV was prepared by Escherichia coli expression system.Monoclonal antibodies were prepared and identified to establish a gold immunochromatographic assay(GICA)for the detection of ASFV.The results showed that the recombinant expression plasmid pET28a-P30 was constructed successfully. Soluble recombinant P30 protein was expressed,and the protein could react with ASFV positive serum.Ten positive hybridoma cells stably secreting monoclonal antibodies against ASFV protein P30 were screened.The ascites ELISA titers of 10 hybridoma cells were higher than 1 ∶ 40 000.These antibodies had no cross-reaction with other common swine viruses,and all of the 10 antibodies could react with ASFV.The obtained antibodies were used to establish a GICA,which could be used to detect ASFV.

Key words: ASFV, P30 protein, Escherichia coli expression system, Monoclonal antibody, Gold immunochromatographic assay

中图分类号:

S852.65

郝丽影, 王彦伟, 孙玉洁, 曹红梅, 黄甜, 逄文强, 李向东, 邓均华, 田克恭. 非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用[J]. 河南农业科学, 2020, 49(10): 124-129.

HAO Liying, WANG Yanwei, SUN Yujie, CAO Hongmei, HUANG Tian, PANG Wenqiang, LI Xiangdong, DENG Junhua, TIAN Kegong. Preparation and Application of Monoclonal Antibodies against P30 Protein of African Swine Fever Virus[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2020, 49(10): 124-129.

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