非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.08.018

河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (8): 154-159.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.08.018

所属专题：非洲猪瘟专题

非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

耿笑林^1,2，孙杰³，王彦伟^1,2，黄甜³，刘鹏^1,2，曹红梅³，逄文强^1,2，郝丽影³，邓均华³，黄玉欣^1,2，田克恭^1,2,3

（1.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳471000；2.普莱柯生物工程股份有限公司，河南洛阳471000；3.洛阳普泰生物技术有限公司，河南洛阳471000）

收稿日期:2021-01-21 出版日期:2021-08-15 发布日期:2021-09-17
通讯作者: 黄玉欣（1974-），女，河南鲁山人，兽医师，主要从事微生物发酵技术研究。E-mail：nvchyx@163.com 田克恭（1964-），男，山西万荣人，教授，博士，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。E-mail：vetvac@126.com
作者简介:耿笑林（1985-），男，河南洛阳人，兽医师，硕士，主要从事微生物发酵工艺研究。E-mail：gengxiaolin1017@163.com 孙杰为同等贡献作者
基金资助:
洛阳市重大科技专项（1901029A）

Prokaryotic Expression of African Swine Fever Virus K145R Protein and Preparation of Monoclonal Antibody

GENG Xiaolin^1,2，SUN Jie³，WANG Yanwei^1,2，HUANG Tian³，LIU Peng^1,2，CAO Hongmei³，PANG Wenqiang^1,2，HAO Liying³，DENG Junhua³，HUANG Yuxin^1,2，TIAN Kegong^1,2

（1.National Research Center for Veterinary Medicine，Luoyang 471000，China；2.Publike Bioengineering Co.，Ltd.，Luoyang 471000，China；3.Luoyang Putai Biotechnology Co.，Ltd.，Luoyang 471000，China）

Received:2021-01-21 Published:2021-08-15 Online:2021-09-17

摘要/Abstract

摘要： 为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫诊断学试剂，利用大肠杆菌系统表达ASFV重组K145R蛋白，制备并鉴定K145R蛋白单克隆抗体。结果显示，成功构建pET28a-K145R表达载体，表达得到大小约为17 ku可溶性的重组K145R蛋白。Western blot分析证实，重组K145R蛋白与ASFV阳性血清有良好的反应性。经细胞融合、筛选，得到单克隆抗体1D4；ELISA检测其效价为1∶5 120 000；亚类鉴定其重链为IgG2a，轻链为κ；Western blot鉴定其能特异性识别重组K145R蛋白；IFA检测其能与ASFV反应。综上，实现K145R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并制备单克隆抗体。

关键词: 非洲猪瘟病毒, K145R蛋白, 原核表达, Western blot鉴定, 单克隆抗体

Abstract: In order to develop an immunodiagnostic reagent for African swine fever virus（ASFV），the recombinant ASFV K145R protein was expressed by E. coli system，and the monoclonal antibody against K145R protein was prepared and identified. The results showed that the pET28a‑K145R expression vector was successfully constructed，and the soluble recombinant protein of K145R with the size of about 17 ku was obtained. Western blot analysis confirmed that recombinant K145R protein had a good
reactivity with ASFV positive serum. A monoclonal antibody 1D4 was obtained by cell fusion and screening. The titer was 1∶5 120 000 by ELISA. The heavy chain was identified as IgG2a and the light chain as κ. Western blot analysis showed that it could specifically recognize recombinant K145R protein.IFA test showed that it could react with ASFV. In summary，the soluble expression of K145R protein in E.coli and the preparation of monoclonal antibody were achieved.

Key words: African swine fever virus, K145R protein, Prokaryotic expression, Western blot identification, Monoclonal antibody

中图分类号:

S855.3

耿笑林, 孙杰, 王彦伟, 黄甜, 刘鹏, 曹红梅, 逄文强, 郝丽影, 邓均华, 黄玉欣, 田克恭. 非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2021, 50(8): 154-159.

GENG Xiaolin, SUN Jie, WANG Yanwei, HUANG Tian, LIU Peng, CAO Hongmei, PANG Wenqiang, HAO Liying, DENG Junhua, HUANG Yuxin, TIAN Kegong. Prokaryotic Expression of African Swine Fever Virus K145R Protein and Preparation of Monoclonal Antibody[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2021, 50(8): 154-159.

图/表 5

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非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

Prokaryotic Expression of African Swine Fever Virus K145R Protein and Preparation of Monoclonal Antibody

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