河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (12): 155-162.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.12.018
刘运超1,杨苏珍1,陈玉梅2,王聚财1,尚延丽1,魏蔷1,陈维聪1,冯华1,张改平1
LIU Yunchao1,YANG Suzhen1,CHEN Yumei2,WANG Jucai1,SHANG Yanli1,WEI Qiang1,CHEN Weicong1,FENG Hua1,ZHANG Gaiping1
摘要: 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶216,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。5F7 和11B3 腹水针对PPV 病毒反应的ELSIA 效价分别为1∶10 240 和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶211和1∶210。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。
中图分类号: