非洲猪瘟专题

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1. 非洲猪瘟病毒p22 蛋白的表达及单克隆抗体制备

颜世君, 郝丽影, 白露露, 郑丁丁, 宋欢欢, 李胜强, 王同燕, 谭菲菲, 邓均华, 田克恭

河南农业科学 2021, 50 (12): 149-154. DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.12.017

摘要（340）

PDF （1421KB）（166）

为研发非洲猪瘟病毒的免疫诊断学试剂，利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒p22蛋白，制备抗p22蛋白单克隆抗体并鉴定其与非洲猪瘟病毒的反应性。结果显示，成功制备重组杆状病毒AcNPV-p22，表达得到大小约22 ku可溶性的重组p22蛋白。Western blot鉴定结果表明，重组p22蛋白可以与非洲猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应。筛选到能够稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株（3D2、4A7），腹水ELISA效价均高于1∶128 000；单克隆抗体亚类分型鉴定结果表明，重链均为IgG1，轻链均为κ；间接免疫荧光试验（IFA）结果表明，制备的单克隆抗体能与非洲猪瘟病毒发生特异性反应。综上，利用杆状病毒-昆虫表达系统成功表达了可溶性的非洲猪瘟病毒重组p22蛋白，并制备抗p22蛋白单克隆抗体。

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2. 非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

耿笑林, 孙杰, 王彦伟, 黄甜, 刘鹏, 曹红梅, 逄文强, 郝丽影, 邓均华, 黄玉欣, 田克恭

河南农业科学 2021, 50 (8): 154-159. DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.08.018

摘要（226）

PDF （1645KB）（147）

为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫诊断学试剂，利用大肠杆菌系统表达ASFV重组K145R蛋白，制备并鉴定K145R蛋白单克隆抗体。结果显示，成功构建pET28a-K145R表达载体，表达得到大小约为17 ku可溶性的重组K145R蛋白。Western blot分析证实，重组K145R蛋白与ASFV阳性血清有良好的反应性。经细胞融合、筛选，得到单克隆抗体1D4；ELISA检测其效价为1∶5 120 000；亚类鉴定其重链为IgG2a，轻链为κ；Western blot鉴定其能特异性识别重组K145R蛋白；IFA检测其能与ASFV反应。综上，实现K145R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并制备单克隆抗体。

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3. 非洲猪瘟病毒 p17蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

白晶晶, 宋欢欢, 白晨雨, 郝丽影, 颜世君, 杜萌萌, 李向东, 邓均华, 田克恭

河南农业科学 2020, 49 (12): 137-143. DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.12.020

摘要（187）

PDF （2385KB）（232）

为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫学诊断试剂，利用杆状病毒表达系统表达了重组ASFV p17蛋白并纯化，然后将其免疫BALB/c小鼠，之后将高血清抗体效价小鼠的脾细胞融合骨髓瘤细胞，通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，筛选到16株能稳定分泌抗p17蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其腹水的效价均介于1∶2.560×10 ⁶～1∶1.024×10 ⁷。抗体亚类鉴定结果显示，6株单克隆抗体（6H6、4D1、7E8、3D1、2F4和2B4）的重链亚类均为IgG1，其余10株单克隆抗体（7H12、10H6、10F3、6E11、4B3、5F7、7H9、6C4、2F1和4H7）的重链亚类均为IgG2a，所有单克隆抗体的轻链亚类均为κ链；IFA鉴定结果表明，共有8株单克隆抗体可特异性识别ASFV。综上，成功制备了ASFV p17蛋白单克隆抗体。

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4. 非洲猪瘟病毒 MGF505-5R蛋白表达与纯化

张素玲, 吴芃, 岳亚男, 白晨雨, 郝丽影, 李向东, 逄文强, 田克恭

河南农业科学 2020, 49 (10): 130-136. DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.018

摘要（129）

PDF （5203KB）（244）

为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒（ASFV）MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体，分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接，构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R，并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化，研究最佳表达条件；采用麦芽糖亲和层析和Ni ²⁺亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化，并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体；应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定。结果显示，MBP-MGF5055R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达，在20 ℃条件下，IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时，重组蛋白可溶性表达量最高；纯化后可获得纯度达90%以上的MGF505-5R蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与MGF505-5R蛋白发生特异性反应。综上，利用大肠杆菌表达系统实现了ASFV MGF505-5R蛋白的可溶性表达，且纯化后重组蛋白纯度较高，具有生物学活性。