非洲猪瘟专题

    Please wait a minute...
    选择: 显示/隐藏图片
    1. 非洲猪瘟病毒p22 蛋白的表达及单克隆抗体制备
    颜世君, 郝丽影, 白露露, 郑丁丁, 宋欢欢, 李胜强, 王同燕, 谭菲菲, 邓均华, 田克恭
    河南农业科学    2021, 50 (12): 149-154.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.12.017
    摘要332)      PDF (1421KB)(154)    收藏
    为研发非洲猪瘟病毒的免疫诊断学试剂,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒p22蛋白,制备抗p22蛋白单克隆抗体并鉴定其与非洲猪瘟病毒的反应性。结果显示,成功制备重组杆状病毒AcNPV-p22,表达得到大小约22 ku可溶性的重组p22蛋白。Western blot鉴定结果表明,重组p22蛋白可以与非洲猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应。筛选到能够稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D2、4A7),腹水ELISA效价均高于1∶128 000;单克隆抗体亚类分型鉴定结果表明,重链均为IgG1,轻链均为κ;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的单克隆抗体能与非洲猪瘟病毒发生特异性反应。综上,利用杆状病毒-昆虫表达系统成功表达了可溶性的非洲猪瘟病毒重组p22蛋白,并制备抗p22蛋白单克隆抗体。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    2. 非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备
    耿笑林, 孙杰, 王彦伟, 黄甜, 刘鹏, 曹红梅, 逄文强, 郝丽影, 邓均华, 黄玉欣, 田克恭
    河南农业科学    2021, 50 (8): 154-159.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.08.018
    摘要224)      PDF (1645KB)(133)    收藏
    为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫诊断学试剂,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组K145R蛋白,制备并鉴定K145R蛋白单克隆抗体。结果显示,成功构建pET28a-K145R表达载体,表达得到大小约为17 ku可溶性的重组K145R蛋白。Western blot分析证实,重组K145R蛋白与ASFV阳性血清有良好的反应性。经细胞融合、筛选,得到单克隆抗体1D4;ELISA检测其效价为1∶5 120 000;亚类鉴定其重链为IgG2a,轻链为κ;Western blot鉴定其能特异性识别重组K145R蛋白;IFA检测其能与ASFV反应。综上,实现K145R蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并制备单克隆抗体。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    3. 非洲猪瘟病毒 p17蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
    白晶晶, 宋欢欢, 白晨雨, 郝丽影, 颜世君, 杜萌萌, 李向东, 邓均华, 田克恭
    河南农业科学    2020, 49 (12): 137-143.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.12.020
    摘要183)      PDF (2385KB)(227)    收藏
    为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用杆状病毒表达系统表达了重组ASFV p17蛋白并纯化,然后将其免疫BALB/c小鼠,之后将高血清抗体效价小鼠的脾细胞融合骨髓瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,筛选到16株能稳定分泌抗p17蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的效价均介于1∶2.560×10 6~1∶1.024×10 7。抗体亚类鉴定结果显示,6株单克隆抗体(6H6、4D1、7E8、3D1、2F4和2B4)的重链亚类均为IgG1,其余10株单克隆抗体(7H12、10H6、10F3、6E11、4B3、5F7、7H9、6C4、2F1和4H7)的重链亚类均为IgG2a,所有单克隆抗体的轻链亚类均为κ链;IFA鉴定结果表明,共有8株单克隆抗体可特异性识别ASFV。综上,成功制备了ASFV p17蛋白单克隆抗体。
    相关文章 | 多维度评价
    4. 非洲猪瘟病毒 MGF505-5R蛋白表达与纯化
    张素玲, 吴芃, 岳亚男, 白晨雨, 郝丽影, 李向东, 逄文强, 田克恭
    河南农业科学    2020, 49 (10): 130-136.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.018
    摘要122)      PDF (5203KB)(232)    收藏
    为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体,分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接,构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R,并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,研究最佳表达条件;采用麦芽糖亲和层析和Ni 2+亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化,并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体;应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定。结果显示,MBP-MGF5055R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达,在20 ℃条件下,IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时,重组蛋白可溶性表达量最高;纯化后可获得纯度达90%以上的MGF505-5R蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与MGF505-5R蛋白发生特异性反应。综上,利用大肠杆菌表达系统实现了ASFV MGF505-5R蛋白的可溶性表达,且纯化后重组蛋白纯度较高,具有生物学活性。
    相关文章 | 多维度评价
    5. 非洲猪瘟病毒 P30蛋白单克隆抗体的制备与应用
    郝丽影, 王彦伟, 孙玉洁, 曹红梅, 黄甜, 逄文强, 李向东, 邓均华, 田克恭
    河南农业科学    2020, 49 (10): 124-129.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.017
    摘要267)      PDF (2854KB)(211)    收藏
    为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法(GICA)。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表达,且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应;制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均高于1∶40 000,与ASFV具有良好的反应性,且不与其他常见猪源病毒反应;利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法,可用于ASFV的检测。
    相关文章 | 多维度评价
    6. 非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备
    李 杰,张星星,郭 晶,孟庆玲,乔 军,张国武,王晓婷,李 妍,才学鹏
    河南农业科学    2018, 47 (9): 126-130.  
    摘要148)      PDF (1128KB)(214)    收藏
    为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的 p30p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建 p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体pET- p30-54,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47.1 ku;Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。
    参考文献 | 相关文章 | 多维度评价