非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (9): 126-130.

所属专题：非洲猪瘟专题

非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备

李杰¹，张星星²，郭晶¹，孟庆玲¹，乔军^1*，张国武¹，王晓婷¹，李妍¹，才学鹏³

（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003； 2.新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室，新疆石河子 832000； 3.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州 730046）

收稿日期:2018-03-16 出版日期:2018-09-15 发布日期:2018-09-15
通讯作者: 乔军（1971-），男，陕西榆林人，教授，博士，主要从事畜禽病原分子生物学研究。E-mail:qj710625@163.com
作者简介:李杰（1995-），女，河南开封人，在读硕士研究生，研究方向:病原分子生物学。E-mail:993205737@qq.com
基金资助:
国家重点研发计划项目（2017YFD0502300）；兵团中青年科技创新领军人才计划项目（2016BC001）

Received:2018-03-16 Published:2018-09-15 Online:2018-09-15

摘要/Abstract

摘要： 为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒（ASFV）血清学诊断抗原，根据ASFV p30和p54基因序列，通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因，利用重叠延伸PCR（SOE-PCR）将2个基因片段串联，构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入pET-28a(+)表达载体中，构建原核表达载体pET-p30-54，转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，用IPTG诱导表达，检测融合蛋白的反应原性，并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示，表达的p30-54融合蛋白分子质量为47.1 ku；Western blot分析显示，该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别，表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠，成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。

关键词: 非洲猪瘟病毒, p30-54融合蛋白, 大肠杆菌表达系统, 多克隆抗体, 反应原性

李杰，张星星，郭晶，孟庆玲，乔军，张国武，王晓婷，李妍，才学鹏. 非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2018, 47(9): 126-130.

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