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2020年 第49卷 第10期
刊出日期：2020-10-15
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综述
作物栽培·遗传育种
农业资源与环境
植物保护
园艺
畜牧·兽医
农业信息与工程·农产品加工

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2020年第49卷第10期目次

2020, 49(10):  0. 

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相关文章 | 计量指标

综述

川芎重金属镉污染现状及降镉策略研究进展

廖雪梅, 陈媛媛, 陶珊, 沙秀芬, 吴宇, 徐正君, 张超, 彭芳

2020, 49(10):  1-11.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.001

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 川芎是著名川产道地药材，由于对镉富集性强，其药用品质安全性及有效性备受关注，如何降低川芎根茎中的镉含量成为目前川芎产业发展的关键之一。阐述了川芎镉污染现状、镉吸收积累规律，进而着重分析了川芎镉污染的影响因素以及降低川芎根茎中镉含量的措施。在土壤修复技术无法短时间内实现川芎安全生产的情况下，提出可通过分子技术和辐射诱变技术相结合选育低富集镉川芎品种的思路，以期为解决川芎重金属污染问题提供参考。

作物栽培·遗传育种

固氮蓝藻和促生细菌SM13对水稻产量和品质的影响

宋维民, 赵坤, 杨帆, 王丽艳, 郭永霞, 王海泽, 荆瑞勇

2020, 49(10):  12-19.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.002

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为了明确固氮蓝藻和促生细菌SM13在田间是否具有增加水稻产量和提高稻米品质的作用，采用田间试验，设置4个处理，即常规施肥对照处理（CK）、施用固氮蓝藻处理（LZ）、施用促生细菌SM13处理（SM）、施用固氮蓝藻和促生细菌SM13处理（SL），分析不同处理间水稻地上部干质量、叶面积、茎秆抗折力、产量和品质等的差异。结果表明，SM处理分蘖期叶面积显著高于CK。SL处理齐穗期总叶面积和地上部干质量均显著高于CK，LZ、SM处理灌浆期地上部干质量均显著高于CK。SL处理水稻倒伏指数低于其他处理，对于茎秆第二节间，其与LZ、SM处理差异显著，对于第三节间，其与SM处理差异显著；LZ、SM处理水稻倒伏指数高于CK，差异不显著。SM、LZ、SL处理的水稻产量较CK分别显著提高了9.46%、7.39%、4.94%。LZ、SM、SL处理的稻米完整性和味道得分均显著高于CK，SL处理的香气得分显著高于CK，但LZ处理的垩白度、垩白粒率均显著高于CK，蛋白质含量显著低于CK。综上，从产量来看，SM处理最优；从抗倒伏性来看，SL处理最优；从稻米品质来看，SM和SL处理较好。

叶面喷施光碳核肥对水稻产量和品质的影响

刘玉兰, 汪勇, 范文忠, 元明浩, 赵洪梅, 翟文博, 孙山, 陈殿元

2020, 49(10):  20-25.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.003

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为了提升水稻产量和品质，以吉宏9为试验材料，在水稻分蘖始期、分蘖盛期、拔节孕穗期、灌浆期，分别喷施1、2、3、4次光碳核肥，喷施光碳核肥各处理化肥施用量均减少20%，研究叶面喷施光碳核肥对水稻产量及品质的影响。结果表明，喷施光碳核肥增加了水稻SPAD值、叶面积指数、干物质质量、千粒质量、结实率、产量，以喷施4次光碳核肥处理效果最好，产量达9 338.85 kg/hm²，较对照增产14.53%。施用光碳核肥能提高水稻稻米糙米率、直链淀粉含量、食味值，降低垩白粒率、垩白度和蛋白质含量，以喷施4次光碳核肥处理的糙米率、精米率、整精米率、直链淀粉含量和食味值最高，垩白粒率、垩白度和蛋白质含量均最低。相关性分析表明，光碳核肥喷施次数与水稻SPAD值、叶面积指数、干物质质量、千粒质量、结实率、产量、糙米率、直链淀粉含量、食味值均呈极显著正相关，与垩白粒率、垩白度、蛋白质含量均呈显著负相关。综上，水稻喷施4次光碳核肥最好，既能提高产量，又能提升品质。

叶面喷锌对糯玉米生理特性、籽粒锌含量及产量的影响

李宇航, 杜天庆, 龚芮, 杨舒添, 翟红梅, 崔福柱, 孙敏, 高志强

2020, 49(10):  26.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.004

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研究不同喷锌量［0(对照)、0.75、2.25、3.75、5.25 kg/hm²］对4个糯玉米品种（晋糯18、晋糯20、彩甜糯1965、晋单糯41）生理特性、籽粒锌含量及产量的影响，以期为糯玉米生物锌强化及高产提供理论依据。结果表明，叶面喷锌0.75～5.25 kg/hm²可有效提高糯玉米的叶绿素含量、过氧化物酶（POD）活性，降低丙二醛（MDA）含量，有效提高籽粒锌含量和产量。4个糯玉米品种籽粒锌含量均在喷锌5.25 kg/hm²条件下最高，分别为16.35、18.23、18.34、20.13 mg/kg，分别比对照提高22.20%、13.44%、17.56%、22.67%，其中晋单糯41籽粒锌含量最高。晋糯18产量在喷锌5.25 kg/hm²条件下最高，为18 371.55 kg/hm²；晋糯20、彩甜糯1965、晋单糯41均在喷锌3.75 kg/hm²条件下最高，分别为15 661.65、13 034.70、16 107.45 kg/hm²；4个糯玉米品种最高产量分别比对照提高26.83%、8.52%、5.13%、11.56%。综合考虑，晋糯18、晋单糯41为锌含量较高品种，可推广种植。

高粱COBRA基因家族全基因组的鉴定和表达分析

元志成, 柯余生, 吴富进, 王建平, 肖乃衍

2020, 49(10):  33-41.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.005

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利用生物信息学和比较基因组学方法对高粱COBRA基因家族进行鉴定，并对其基因结构、系统进化、选择压力和表达模式进行分析，为进一步研究COBRA基因功能奠定基础。结果表明，在高粱基因组中共鉴定出10个COBRA基因，分别命名为SbBC1和SbBC1L1—SbBC1L9，其中5个成员分布于1号染色体，4个成员分布于2号染色体，仅SbBC1L6分布于6号染色体，同时明确了SbBC1L1和SbBC1L3、SbBC1和SbBC1L4、SbBC1L2和SbBC1L5共6个成员是由3次串联复制事件产生。此外，这些基因编码蛋白质在N端都具有信号肽和CCVS保守结构域，除SbBC1L5外，其他9个成员C端都有GPI锚定蛋白的ω-位点。系统进化分析显示，COBRA基因家族可以分为两组，第一组包含A、B亚组；第二组包含C、D、E和F亚组。其中，B亚组产生于单子叶和双子叶植物分化之后，属于单子叶植物特有类群，而C亚组在单子叶和双子叶植物中都发生COBRA基因丢失。Ka(非同义替换率)/Ks（同义替换率）值揭示，所有高粱COBRA基因在进化过程中都受到了纯化选择。表达分析显示，在高粱的11个检测样本中，所有家族成员存在差异表达，其中SbBC1L1在11个样本中都有很高的表达量；SbBC1、SbBC1L3和SbBC1L4在ABA（脱落酸）处理的根、雌蕊和新生花序中表达量较高；SbBC1L5和SbBC1L6在花药中的表达量较高。

基于SSR分子标记的红安县省沽油遗传多样性分析

李静, 田思雨, 毛威涛, 姚国新

2020, 49(10):  42-47.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.006

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为加强湖北省红安县省沽油（Staphylea bumalda DC.）野生资源保护利用，了解红安县省沽油的遗传多样性概况，在红安县境内24个点采集24份省沽油野生种质资源，利用有多态性的21对SSR引物对红安县省沽油样本进行遗传多样性分析，并进行聚类分析。结果表明，21对SSR引物共检测到56个等位变异，平均每对引物可检测2.95个等位变异；有效等位基因数（Ne）为0.635 4～2.748 2个，平均为1.622 3个；Shannon-Weaver多样性指数（I）为0.296 3～1.731 9，平均为0.772 9；Nei’s遗传多样性指数为0.157 4~0.762 5，平均为0.361 8；多态性信息含量(PIC)为0.115 4～0.752 3，平均为0.438 9，所筛选的21对引物能较好地反映红安县省沽油不同地点间的遗传多样性信息。聚类分析结果表明，遗传相似系数（GS）为0.58～0.93，平均值为0.78，可将红安县省沽油分为两大类。

芝麻株高和叶龄对盛花期渍水响应的定量分析

李国强, 张建涛, 李亚丽, 周萌, 陈丹丹, 胡峰, 辛银平, 郑国清

2020, 49(10):  48-55.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.007

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为揭示盛花期不同渍水时长对芝麻株高和叶龄的影响，采用盆栽试验方式，以耐湿型中芝13和敏感型郑芝13为对象，在盛花期设置CK(不渍水)和渍水24、36、48、60 h共5个处理,采用生长函数和归一化法，以苗后相对天数为自变量，相对株高为因变量，构建模型定量分析芝麻株高和叶龄的生长曲线。结果表明，渍水造成芝麻株高增高，叶龄降低。株高和叶龄变化趋势符合“S”曲线，采用Logistic方程可较好地模拟芝麻株高和叶龄生长动态。株高和叶龄拟合模型的RMSE分别为14.68 cm和2.49对，决定系数（R²）分别为0.970和0.975；渍水对相对株高最大值（k）和相对叶龄最大值（k′）有显著影响。中芝13和郑芝13 4个渍水处理（W24h、W36h、W48h和 W60h）k均值较CK分别增长9.34%和10.16%，k′均值分别降低10.69%和10.16%。中芝13和郑芝13渍水处理株高T_max均小于0.554。中芝13 渍水处理叶龄的T_max介于0.554～0.590（相对渍水时间），而郑芝13 W24h和W36h处理叶龄的T_max介于0.554～0.590，W48h和W60h处理的T_max小于0.554。中芝13株高的T₁、T₂、T₃、t₂、h₂和h₃渍水处理均值高于郑芝13，而V₂和V₃均值小于郑芝13；中芝13叶龄的T₂、T₃、t₂渍水处理均值高于郑芝13，而T₁、V₂、V₃、h₂、h₃均值小于郑芝13。株高和叶龄对渍水的响应差异主要体现在株高增长相对持续时间（T₁、T₂和T₃）和株高增长速率（V₂和V₃）以及叶龄快增期和缓增期的相对增长速率（V₂和V₃）上。

烟草长柄分泌型腺毛的遗传分析

李雪君, 王召军, 李耀宇, 平文丽, 孙焕, 马彩娟, 陈飞, 孙计平

2020, 49(10):  56-62.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.008

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烟草长柄分泌型腺毛的分泌物对烟叶的品质有重要影响，为了明确长柄腺毛的遗传特性，以纯合长柄分泌型腺毛烟草材料T.I.1068为父本、非分泌型腺毛烟草材料T.I.1112为母本，构建6个世代的群体（P₁、P₂、F₁、F₂、BC₁、BC₂），利用主基因+多基因混合遗传模型分离分析方法，研究烟草长柄分泌型和非分泌型腺毛的遗传规律。结果表明，烟草长柄分泌型腺毛与非分泌型腺毛相对比例的遗传由2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性上位性多基因模型控制。BC₁、BC₂和F₂世代主基因的遗传率分别为80.05%、97.88%和96.50%，主基因遗传率很高，可以在早代进行腺毛种类的选择；BC₁、BC₂和F₂世代多基因的遗传率分别为16.15%、1.55%和2.75%，BC₁代应考虑多基因的影响，BC₂和F₂代多基因的影响较小。可见，长柄分泌型与非分泌型腺毛相对比例的遗传受2对主基因控制，以主基因效应为主，受基因间的互作的影响。

农业资源与环境

添加畜禽粪便对中药渣好氧堆肥发酵特性及纤维素、木质素降解率的影响

周曾艳, 余高, 陈芬, 卢心, 唐帮成, 王浩楠, 谭杰斌

2020, 49(10):  63-69.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.009

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为探讨添加外源有机物料对中药渣好氧堆肥效果的影响，以中药渣堆肥（CK，100%中药渣）为对照，研究添加鸡粪（T1，70%中药渣+30%鸡粪）、猪粪（T2，70%中药渣+30%猪粪）、牛粪（T3，70%中药渣+30%牛粪）等外来碳源和氮源对中药渣好氧堆肥过程中堆体温度、pH值及纤维素、木质素的降解情况和堆肥前后养分变化以及堆肥后有效活菌数的影响。结果表明：添加畜禽粪便后提高了堆体温度，降低了堆体pH值，有利于微生物的生长繁殖，促进了中药渣纤维素、木质素降解和有机质的分解矿化，从而加快了堆肥的进程。堆肥后T1处理的有效活菌数最大，达到0.72×10⁹ cfu/g，较T2、T3处理、CK分别升高89.47%、33.33%、125.00%；T1处理碳氮比显著低于其他3个处理，腐熟化程度最高；T1处理纤维素、木质素降解率均高于其他处理，较其他处理分别提高了4.50%～15.42%和6.14%～20.02%。由此可见，添加鸡粪更有利于提高中药渣好氧堆肥的进程和腐殖化程度。

不同调控措施对连作高粱生长及根际土壤微生物群落结构的影响

樊芳芳, 白文斌, 王磊, 王劲松, 聂萌恩, 刘鹏, 李光, 范昕琦

2020, 49(10):  70-77.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.010

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为了明确不同调控措施对高粱连作障碍的缓解作用，采用盆栽试验，设置了高粱连作（T1）、高粱连作施加生态调理剂（T2）、高粱/玉米轮作（T3）3个处理，探究不同调控措施对高粱生长、高粱根际土壤微生物群落功能多样性、细菌和真菌的基因香农指数的影响。结果表明，施加生态调理剂和高粱/玉米轮作都可促进高粱生长，施加生态调理剂高粱的株高、茎粗和干物质量分别比连作显著增加16.95%、13.33%和19.82%，高粱/玉米轮作高粱的茎粗、生物量分别比连作显著增加12.00%、16.22%。高粱根际土壤微生物群落对碳源的利用能力表现出：高粱/玉米轮作土壤的平均颜色变化率（AWCD）最高，在培养96 h时比连作、施加生态调理剂处理分别高出16.72%、19.15%（P<0.05），施加生态调理剂和高粱/玉米轮作处理均增加了高粱根际土壤微生物群落的碳源利用能力。对细菌、真菌的DGGE图谱进行分析，结果显示，高粱根际土壤中细菌条带较为丰富，不同处理在条带数量及条带亮度上有所差别，高粱/玉米轮作处理的根际土壤细菌群落的香农指数显著高于连作处理，真菌18S在条带数量上有明显差别，连作、施加生态调理剂处理都出现特异性条带，这表明在连作高粱根际土壤中真菌18S区的基因香农指数较高。施加生态调理剂和与高粱/玉米轮作都可在一定程度上缓解高粱连作障碍，施加生态调理剂效果最佳。

植物保护

猕猴桃贮藏中常见病原菌的分离鉴定及抗菌中药的筛选

吕蕊花, 林枞, 白崇旭, 方亚妮, 冯昭, 史琳娜, 吕瑞华, 张喜荣

2020, 49(10):  78-84.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.011

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为了明确猕猴桃在贮藏过程中常见病原菌的种类，探究有效的防治措施，采用植物组织分离法从贮藏期猕猴桃病果中分离病原菌，经形态学观察、ITS序列分析明确其分类地位，采用含常见抑菌中药材的PDA平板对病原菌菌丝生长进行抑菌效果测定。形态学和ITS序列分析结果表明，分离出5种病原菌，分别被鉴定为多变根毛霉菌［Mucor irregularis(Rhizomucor variabilis)］、黑斑病菌(Alternaria brassicae)、葡萄球座菌(Botryosphaeria dothidea)、链格孢菌(Alternaria alternate)、间座壳菌(Diaporthe eres)。中药抑菌效果测定结果显示，0.3 g/mL PDA培养基的蛇床子、苦楝皮和连翘对几种猕猴桃病原菌的抑菌效果较好，对5种病原菌菌丝生长速率的抑制率可达70%以上，显著高于其他单味中药。抑菌中药对猕猴桃贮藏过程中常见病原菌具有较好的抑制作用，具有潜在的生产应用价值。

25%山苍子油水乳剂的研发及其对马铃薯晚疫病菌的防治效果

刘甜甜, 张星, 熊兴耀, 刘韬, 李晓刚, 周倩

2020, 49(10):  85-91.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.012

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为开发利用山苍子油，实现马铃薯晚疫病的绿色防控，利用纯植物提取物山苍子油配制成25%山苍子油水乳剂，分别在室内平板纯培养和田间接种条件下，对马铃薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）进行了室内抑菌试验及田间防效测定。结果表明，25%山苍子油水乳剂的1 500、1 800倍稀释液对马铃薯晚疫病菌菌丝生长的抑制率分别达到98.2%、94.6%，该药剂的田间防效达75.00%。可见，25%山苍子油水乳剂能够通过抑制菌丝生长的方式，阻止晚疫病菌对马铃薯植株的为害，实现对马铃薯晚疫病的绿色防控，为马铃薯晚疫病的防治提供了新的思路。

园艺

不同茄子品种幼苗期耐盐性评价

吴宏琪, 林碧英, 李彩霞, 刘旭, 张子昆, 钟路明

2020, 49(10):  92-100.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.013

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以圆绿茄（圆形、绿茄）、秀娘（长卵形、紫黑茄）、农友长茄（长形、紫茄）、福农绿茄（椭圆形、绿白相间花茄）、圆紫茄（圆形、紫茄）、7号白茄（椭圆形、白茄）等6种不同果型、果色的茄子品种为试材，120 mmol/L NaCl溶液为胁迫条件，研究盐胁迫对茄子幼苗形态及生理指标的影响，再结合主成分分析及隶属函数综合评价法，对参试茄子品种耐盐性进行评价，以期获得茄子耐盐性筛选的可靠指标。结果表明，各品种形态与生理指标的综合分值排序与隶属函数综合评价法鉴定茄子耐盐性的结果一致，耐盐性大小依次为福农绿茄>农友长茄>7号白茄>圆绿茄>秀娘>圆紫茄，说明福农绿茄、农友长茄品种耐盐性较强，7号白茄、圆绿茄、秀娘其次，圆紫茄品种耐盐性最弱，其中脯氨酸含量及壮苗指数可作为茄子耐盐性快速鉴定的可靠指标，为茄子耐盐性种质资源利用提供理论依据。

超表达桃树PpADC基因导致番茄矮化和晚花研究

王保全, 张晓娜, 李国怀

2020, 49(10):  101-107.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.014

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为研究精氨酸脱羧酶基因（ADC）在桃树生长发育中的生物学功能，将PpADC基因超量表达载体遗传转化番茄，观测转基因植株生长发育状况，并分析外源赤霉素对转基因植株生长发育的影响。结果表明，PpADC基因在转基因番茄中过量表达，转基因株系#21和#58中腐胺含量分别高于野生型番茄25.54%和30.17%，转基因植株在生长发育过程中表现出矮化和晚花，在转基因株系#21和#58植株中GA20ox1和GA3ox1基因表达量明显低于野生型番茄，外施赤霉素能恢复转基因植株株高，却无法恢复转基因植株的发育进程。由此可见，基因PpADC促进植物体内腐胺合成，下调赤霉素合成，导致植物生长矮化和发育迟缓。

缩节胺、多效唑对核桃枝叶生长及坚果品质的影响

徐一荻, 宋岩, 姜延付, 韩秀锋, 张锐, 张述斌, 高山, 毛洪霞

2020, 49(10):  108-115.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.015

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为了解植物生长延缓剂对核桃枝叶生长及果实品质的影响，以7年生新新2号核桃树为试验材料，以清水为对照，利用200、300、400、500 mg/L的缩节胺（DPC）和500、1 000、2 000、3 000 mg/L的多效唑（PP₃₃₃）在核桃果实膨大期和硬核期进行2次诱导，测定核桃果枝和营养枝的长度及粗度、果实品质指标，观察叶片解刨结构，分析不同的生长延缓剂对核桃枝条生长、叶片组织结构和果实品质的影响。结果表明，与对照相比，施用缩节胺和多效唑基本上可降低核桃生育时期营养枝长度和粗度总增长量及果枝长度总增长量，缩节胺对果枝粗度无显著影响；2 000 mg/L多效唑可降低栅海比、栅栏组织/叶厚，且单宁含量显著低于对照。200 mg/L缩节胺与500 mg/L多效唑处理核桃果实综合品质表现最好。200 mg/L缩节胺处理果实可溶性糖含量和单宁含量分别比对照增加5.3%、18.2%；500 mg/L多效唑处理核桃果实可溶性糖和还原糖含量分别比对照增加15.8%、12.0%。在膨大期喷施缩节胺或多效唑的控梢效果最佳，且缩节胺和多效唑质量浓度分别为200、500 mg/L时核桃果实综合品质最优，可用于新新2号树体控梢。

菌根真菌对重度干旱胁迫下桃叶杜鹃生理生化的影响

李林盼, 欧静, 陈荣建, 杨舒婷, 何跃军

2020, 49(10):  116-123.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.016

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为了解菌根化桃叶杜鹃（Rhododendron annae）幼苗对重度干旱胁迫的适应机制，以接种2种杜鹃花类菌根(ERM)菌株（TY29、TY35）及不接菌处理（CK）的1年生桃叶杜鹃幼苗为试材，采用盆栽控水法研究重度干旱胁迫下菌根化桃叶杜鹃幼苗生理生化特性的动态变化。结果表明，CK游离脯氨酸（Pro）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性在重度干旱7 d达到最大值，丙二醛(MDA)含量在重度干旱14 d达到最大值；接菌处理游离Pro含量、SOD活性则在重度干旱14 d达到最大值，MDA含量在重度干旱21 d达到最大值；接种ERM菌株处理总体上显著提高桃叶杜鹃游离Pro含量、SOD活性，延缓MDA生成。重度干旱下，桃叶杜鹃内源激素含量变化不一，接种ERM处理总体上显著增加桃叶杜鹃叶片和根系IAA、ABA、GA₃、ZR含量，降低IAA/ABA、ZR/ABA、（IAA+ZR+GA₃）/ABA值。可见，随着胁迫时间的持续，ERM可以通过调控游离Pro、MDA、内源激素含量及SOD活性缓解重度干旱对桃叶杜鹃的伤害，接菌处理桃叶杜鹃更能适应长时间的重度干旱胁迫环境。

畜牧·兽医

非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用

郝丽影, 王彦伟, 孙玉洁, 曹红梅, 黄甜, 逄文强, 李向东, 邓均华, 田克恭

2020, 49(10):  124-129.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.017

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为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫学诊断试剂，利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白，制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体，建立检测ASFV的胶体金免疫层析法（GICA）。结果显示，成功构建了重组表达质粒pET28a-P30，实现了重组P30蛋白的可溶性表达，且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应；制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，腹水ELISA效价均高于1∶40 000，与ASFV具有良好的反应性，且不与其他常见猪源病毒反应；利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法，可用于ASFV的检测。

非洲猪瘟病毒MGF505-5R蛋白表达与纯化

张素玲, 吴芃, 岳亚男, 白晨雨, 郝丽影, 李向东, 逄文强, 田克恭

2020, 49(10):  130-136.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.018

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为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒（ASFV）MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体，分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接，构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R，并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化，研究最佳表达条件；采用麦芽糖亲和层析和Ni²⁺亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化，并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体；应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定。结果显示，MBP-MGF5055R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达，在20 ℃条件下，IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时，重组蛋白可溶性表达量最高；纯化后可获得纯度达90%以上的MGF505-5R蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与MGF505-5R蛋白发生特异性反应。综上，利用大肠杆菌表达系统实现了ASFV MGF505-5R蛋白的可溶性表达，且纯化后重组蛋白纯度较高，具有生物学活性。

猪伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

程璇, 付朋飞, 杜永坤, 褚贝贝, 杨国宇, 王江

2020, 49(10):  137-142.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.019

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为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体，以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠，取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合，制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选出1株稳定分泌PRV gB蛋白抗体的单克隆细胞系，经鉴定该细胞系所分泌抗体为IgG1亚型，腹水纯化抗体的IFA效价为2-11；细胞培养上清和腹水纯化抗体用于Western blot的最佳稀释比分别为1∶50和1∶5 000；杂交瘤细胞诱导小鼠腹水的中和效价为1∶25。IPMA、IFA及Western blot试验结果显示，制备的单克隆抗体能特异性识别PRV gB蛋白。

表达PCV2 Cap蛋白重组复制缺陷型腺病毒黏膜免疫效果

邓祖丽颖, 刘雨丰, 马宁宁, 陈陆

2020, 49(10):  143-148.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.020

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为研发高效的猪圆环病毒2型(PCV2)黏膜疫苗，通过口服、肌内和滴鼻途径，将表达PCV2 Cap蛋白主要抗原表位的重组复制缺陷型腺病毒（rAd/Cap/518）免疫Balb/c小鼠，同时以无外源基因的空腺病毒（wild-rAd）经滴鼻途径免疫Balb/c小鼠作为对照组，分别检测小鼠血清中IgG和唾液、肺部、肠道灌洗液中IgA抗体水平，脾脏T淋巴细胞亚群及相关细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平以及淋巴结、脾脏和肺组织中PCV2病毒载量，评价其黏膜免疫效果。结果显示，与对照组相比，rAd/Cap/518经肌内途径免疫诱导产生的血清IgG抗体水平显著增加；经滴鼻和口服途径免疫诱导产生的局部黏膜部位IgA抗体水平显著增加。rAd/Cap/518经滴鼻、肌内和口服3种途径免疫诱导产生的CD3+T细胞百分率为46.60％~55.65％，经滴鼻免疫诱导产生的 CD3+CD4+T细胞百分率为34.43％~37.29％，经肌内和口服途径免疫诱导产生的CD3+CD4+T细胞百分率为36.35％~41.58％，经滴鼻途径免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为12.39％~18.32％，经口服免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为16.29％，均显著高于对照组。rAd/Cap/518经滴鼻途径免疫后，能诱导小鼠脾脏和肠系膜淋巴细胞分泌IFN-γ。攻毒后免疫鼠体内病毒载量显著降低。综上，rAd/Cap/518经肌内途径免疫主要诱导全身性免疫应答，经滴鼻和口服途径免疫能诱导全身性和局部黏膜免疫应答，是一种很有前景的黏膜免疫候选疫苗。

蜘蛛香提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

秦枫, 刘云, 吴植, 吴双, 郭长明, 顾玲玲, 吴晓洁, 朱善元

2020, 49(10):  149-155.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.021

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为研究蜘蛛香提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用，建立Marc-145细胞模型，以利巴韦林作为阳性对照药物，采用观察细胞病变法及MTT比色法，在研究蜘蛛香提取物对Marc-145细胞最大安全质量浓度的基础上，设立蜘蛛香水提物及醇提物组、利巴韦林阳性对照组、PRRSV对照组和细胞对照组，对PRRSV进行阻断、抑制和直接灭活的测定。结果显示，蜘蛛香水提取物对PRRSV的阻断、抑制作用的最高抑制率分别为44.6%、37.9%，均极显著（P<0.01）低于利巴韦林阳性对照组，且细胞出现了较明显的病变。蜘蛛香醇提取物对PRRSV的阻断、抑制作用的最高抑制率分别为107.1%、102.6%，极显著（P<0.01）高于利巴韦林阳性对照组，细胞形态基本完好。蜘蛛香水提物和醇提物对病毒直接灭活作用的最高抑制率分别为83.5%和120.9%，均极显著（P<0.01）高于利巴韦林阳性对照组。可见，蜘蛛香醇提物抗PRRSV的作用较强。

藏猪甲基转移酶3a基因的SNP筛选及其在精子中的表达分析

赵彦玲, 李善政, 王福成, 王建洲, 任子利

2020, 49(10):  156-161.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.022

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为筛选藏猪DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)基因的单核苷酸多态性（SNP），分析Dnmt3a基因在藏猪精子中的表达水平，采用PCR-直接测序法对藏猪、大白猪、滇南小耳猪Dnmt3a基因进行SNP分析；分别应用实时荧光定量PCR技术、Westen blot方法对藏猪、大白猪精子中Dnmt3a基因的mRNA与蛋白质表达水平进行检测。结果显示，在Dnmt3a基因5′侧翼和第11外显子区发现2个SNP位点，位于藏猪Dnmt3a基因的5′侧翼区起始密码子上游2 012 bp处的SNP（C→T）位点，其杂合度、多态信息含量均较高，表明群体内变异程度大、能提供的遗传信息较多，但该位点不是藏猪特有的SNP；位于藏猪Dnmt3a基因的第11外显子区第1 360 bp处的SNP（C→T）位点，其杂合度、多态信息含量均较低，表明群体内变异程度小、能提供的遗传信息较少。藏猪精子中，Dnmt3a基因mRNA与蛋白质水平上的相对表达量均显著(P＜0.05）低于大白猪。以上结果表明，藏猪Dnmt3a基因5′侧翼区起始密码子上游2 012 bp的突变位点可以作为藏猪分子育种中的候选标志；相对于大白猪，Dnmt3a基因在藏猪精子中mRNA及蛋白质水平上的低表达可能是藏猪精子高原适应性的DNA甲基化机制之一。

农业信息与工程·农产品加工

复合菌种发酵烟叶产酶及挥发性风味物质变化

帅瑶, 陶菡, 田运霞, 田永锋, 程凯, 何腊平

2020, 49(10):  162-175.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.023

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为研究菌株混合发酵对烟叶品质的影响，通过使用解淀粉芽孢杆菌GUHP86与GZU03复配菌种对大理红大CL314烟叶进行人工控制发酵，对发酵工艺进行探究，采用气相-质谱联用仪（GC-MS）检测发酵前后风味物质变化。在单因素和Plackett-Burman试验的基础上，采用中心组合设计(Central composite design)响应面法对发酵条件进行探究，得到最佳发酵工艺：复配菌种接种量24.0%、葡萄糖添加量1.20%、水分含量40%、接种比例（GZU03∶GUHP86）1∶1、大豆蛋白添加量1.00%。GC-MS检测发现，发酵后烟叶中由于解淀粉芽孢杆菌的代谢作用，烟碱相对含量降低6.84个百分点，多种烟叶香味物质如芳樟醇、β-大马酮和β-紫罗兰酮等相对含量增加。结果表明，复合菌发酵比单菌发酵和自然发酵对烟叶质量提升有明显作用。可见对烟叶进行混菌发酵，能缩短发酵时间，提高蛋白酶活力和烟叶感官质量。

新鲜黄秋葵纳米ZnO协同紫外照射保鲜研究

吉仙枝, 王华芳

2020, 49(10):  176-180.  DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.024

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为延长新鲜黄秋葵货架期，提升贮藏黄秋葵产品品质，采用纳米ZnO协同紫外照射联合方式对新鲜黄秋葵进行保鲜处理。研究不同纳米ZnO添加量、紫外强度和紫外照射时长对黄秋葵产品细菌总数、蛋白质含量、维生素C含量以及色相角的影响；以各品质指标为对象，对不同保鲜条件下黄秋葵保鲜过程进行加权综合评价。结果显示，协同保鲜处理能够降低贮藏黄秋葵产品细菌总数，提升产品品质；当ZnO添加量为0.03 g/kg、紫外强度为220 V、紫外照射时长为15 min时，黄秋葵保鲜加权综合评分值最高，为0.65，黄秋葵货架期延长至40 d，试验范围下，该条件最适合应用于新鲜黄秋葵保鲜中。综上，ZnO协同紫外照射方式能够有效降低新鲜黄秋葵贮藏期间的细菌总数，可以作为延长新鲜黄秋葵货架期的有效处理手段。