非洲猪瘟病毒p17蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.12.020

河南农业科学 ›› 2020, Vol. 49 ›› Issue (12): 137-143.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.12.020

所属专题：非洲猪瘟专题

非洲猪瘟病毒p17蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

白晶晶¹，宋欢欢²，白晨雨¹，郝丽影¹，颜世君²，杜萌萌²，李向东²，邓均华¹，田克恭^1,2

（1.洛阳普泰生物技术有限公司，河南洛阳 471000；2.国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳 471000）

收稿日期:2020-05-21 出版日期:2020-12-15 发布日期:2020-12-15
通讯作者: 邓均华（1978-），女，四川阆中人，兽医师，硕士，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。E-mail:dengbetter88@163.com
作者简介:白晶晶（1987-），女，河南巩义人，助理工程师，本科，主要从事兽用诊断试剂研究。E-mail:15138755156@163.com宋欢欢为同等贡献作者
基金资助:
郑洛新国家自主创新示范区创新引领型产业集群项目（181200211700）；洛阳市重大科技专项；国家“万人计划”青年拔尖人才项目

Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies against African Swine Fever Virus p17 Protein

BAI Jingjing¹,SONG Huanhuan²,BAI Chenyu¹,HAO Liying¹,YAN Shijun²,DU Mengmeng²,LI Xiangdong²,DENG Junhua¹,TIAN Kegong^1,2

(1.Luoyang Putai Bio-Tech Co.,Ltd.,Luoyang 471000,China; 2.National Research Center for Veterinary Medicine,Luoyang 471000,China)

Received:2020-05-21 Published:2020-12-15 Online:2020-12-15

摘要/Abstract

摘要： 为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫学诊断试剂，利用杆状病毒表达系统表达了重组ASFV p17蛋白并纯化，然后将其免疫BALB/c小鼠，之后将高血清抗体效价小鼠的脾细胞融合骨髓瘤细胞，通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，筛选到16株能稳定分泌抗p17蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其腹水的效价均介于1∶2.560×10⁶～1∶1.024×10⁷。抗体亚类鉴定结果显示，6株单克隆抗体（6H6、4D1、7E8、3D1、2F4和2B4）的重链亚类均为IgG1，其余10株单克隆抗体（7H12、10H6、10F3、6E11、4B3、5F7、7H9、6C4、2F1和4H7）的重链亚类均为IgG2a，所有单克隆抗体的轻链亚类均为κ链；IFA鉴定结果表明，共有8株单克隆抗体可特异性识别ASFV。综上，成功制备了ASFV p17蛋白单克隆抗体。

关键词: 非洲猪瘟病毒, p17蛋白, 杆状病毒表达系统, 单克隆抗体, 间接免疫荧光试验

Abstract: In order to develop ASFV immunodiagnostic reagents,the purified recombinant ASFV p17 protein that expressed in baculovirus was utilized for immunization of BALB / c mice,and then the positive hybridoma which produced after fusion of spleen cells of the mice with high serum antibody titers to myeloma cells,was conducted by indirect ELISA. A total of 16 hybridomas that secreted specific MAbs against ASFV p17 were obtained,and the titers of ascites in all strains were between 1∶2.560×10⁶and 1∶1.024 ×10⁷.MAbs isotype assay showed that heavy chain of 6 MAbs(6H6,4D1,7E8,3D1,2F4 and 2B4) were IgG1,and the rest of 10 MAbs(7H12,10H6,10F3,6E11,4B3,5F7,7H9,6C4,2F1 and 4H7) were IgG2a,while the light chain type of all the MAbs was κ.The results of IFA showed that 8 MAbs could react with ASFV.In summary,MAbs against ASFV p17 protein was successfully prepared.

Key words: African swine fever virus(ASFV), p17 protein, Baculovirus expression system, Monoclonal antibody, Indirect immunofluorescence assay

中图分类号:

S852.6

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