河南农业科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (6): 85-87,,120.

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甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

秦艳红,乔奇,张德胜,田禹婷,王爽,王永江,张振臣*   

  1. 河南省农业科学院 植物保护研究所,河南省农作物病虫害防控重点实验室,农业部华北南部农作物病虫害综合治理重点实验室,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2013-03-19 出版日期:2013-06-15 发布日期:2013-06-15
  • 通讯作者: 张振臣(1964-),男,河南延津人,研究员,博士,主要从事植物病毒学研究。E-mail:zhangzhenchen@126.com
  • 作者简介:秦艳红(1977-),河南博爱人,助理研究员,博士,主要从事植物病毒学研究。E-mail:qinyanhong6040@sina.com
  • 基金资助:
    国家甘薯产业技术体系建设项目(CARS-11-B-07)

  • Received:2013-03-19 Published:2013-06-15 Online:2013-06-15

摘要: 克隆甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)外壳蛋白(CP)基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中进行诱导表达。根据已报道的甘薯褪绿矮化病毒西非(WA)株系基因组核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法克隆了SPCSV四川分离物基因组RNA2上1 902bp大小的片段。序列分析表明,该片段包括部分p60基因序列、完整的p8基因和CP基因(major CP)序列及部分mCP基因(minor CP)序列。CP基因由774个核苷酸组成,编码257个氨基酸残基,与已发表的SPCSV WA株系Can181-9分离物相比,其核苷酸和氨基酸序列一致性分别为99.48%和99.22%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达的融合蛋白分子量约为38kD,为SPCSV抗血清的制备及其血清学检测技术的建立奠定了基础。 

关键词: 甘薯褪绿矮化病毒, 基因克隆, 序列分析, 外壳蛋白, 原核表达