河南农业科学 ›› 2015, Vol. 44 ›› Issue (1): 139-142.

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绵羊早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

刘静静,刘月琴*,张英杰   

  1. 河北农业大学 动物科技学院,河北 保定 071000
  • 收稿日期:2014-08-04 出版日期:2015-01-15 发布日期:2015-01-15
  • 通讯作者: 刘月琴(1966-),女,河北保定人,教授,硕士,主要从事动物遗传育种与繁殖研究。E-mail:liuyueqin66@126.com
  • 作者简介:刘静静(1986-),女,河南开封人,在读硕士研究生,研究方向:动物繁殖调控。E-mail:1030935377@qq.com
  • 基金资助:
     
    国家肉羊产业技术体系项目(CARS-39)

  • Received:2014-08-04 Published:2015-01-15 Online:2015-01-15

摘要: 为制备绵羊早孕因子(EPF)单克隆抗体,以纯化的EPF重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选单克隆抗体细胞株,将筛选的细胞株注入小鼠腹腔得到腹水型抗体,用G-sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化,应用SDS-PAGE和Western blot分析抗体纯化后的纯度及特异性。结果显示,细胞融合后得到了1株抗绵羊EPF单克隆抗体的细胞株B4D5,纯化后的腹水型单克隆抗体纯度较高,具有较强的特异性,应用单克隆抗体检测绵羊妊娠准确率为81.3%。表明,制备的绵羊早孕因子单克隆抗体为特异性抗绵羊EPF抗体。

关键词: 绵羊, 早孕因子, 单克隆抗体, 特异性