铜绿假单胞菌F190—342-I21—83基因的克隆及其融合蛋白的原核表达

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (12): 132-136.

铜绿假单胞菌_F190—342-I_21—83基因的克隆及其融合蛋白的原核表达

张明亮^1,2,3，闫新武⁴，孙长江²，顾敬敏²，崔子寅²，韩文瑜^2*

（1.河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站，河南安阳 455000； 2.吉林大学动物医学学院，吉林长春130062；3.安阳工学院生物与食品工程学院，河南安阳455000； 4.河南省孟津县动物卫生监督所，河南孟津 471100）

收稿日期:2018-06-06 出版日期:2018-12-15 发布日期:2018-12-15
通讯作者: 韩文瑜（1955-），男，河北阜城人，教授，博士，主要从事兽医微生物学和免疫学研究。E-mail：hanwy@jlu.edu.cn
作者简介:张明亮（1985-），男，河南驻马店人，讲师，博士，主要从事病原微生物和分子免疫学研究。E-mail：mingliang90909@163.com。闫新武为同等贡献作者
基金资助:
国家高技术研究发展计划项目（2011AA10A210）；国家自然科学基金青年基金项目（31802170）；安阳工学院博士科研启动基金项目（BSJ2016013）

Received:2018-06-06 Published:2018-12-15 Online:2018-12-15

摘要/Abstract

摘要： 为了研究铜绿假单胞菌外膜蛋白F和I的重要表位，根据已公布的F和I基因序列设计2对特异性引物，以分离的水貂源铜绿假单胞菌ZHDL9基因组为模板，扩增重要的表位基因F_190—342（F1）和I_21—83（I2），并对得到的2段基因序列进行生物信息学分析。结果表明，PCR扩增所得F1和I2两段基因序列高度保守，不存在核苷酸的插入和缺失；通过融合PCR技术将得到的F1基因和I2基因无缝连接，得到 651 bp的融合基因F1I2。将融合基因F1I2克隆至原核表达载体pET-28a，成功构建了融合表达质粒pET-28a-F1I2；将pET-28a-F1I2转化大肠杆菌BL21（DE3），成功构建重组菌株BL21（pET-28a-F1I2），并对重组菌株进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明，成功表达了融合蛋白F1I2，且融合蛋白能够被His镍柱纯化；Western Blotting检测表明，表达的融合蛋白F1I2与铜绿假单胞菌ZHDL9菌株感染的水貂血清具有较好的反应原性。

关键词: 铜绿假单胞菌, F基因, I基因, 克隆, 融合蛋白, 原核表达

张明亮，闫新武，孙长江，顾敬敏，崔子寅，韩文瑜. 铜绿假单胞菌_F190—342-I_21—83基因的克隆及其融合蛋白的原核表达[J]. 河南农业科学, 2018, 47(12): 132-136.

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