河南农业科学 ›› 2022, Vol. 51 ›› Issue (11): 119-126.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.11.014
王勋1,2,李鸽3,李青梅2,吕镕州1,2,孟泽锟1,2,柴书军2,杨继飞2,郭军庆2,张改平1,2,4
WANG Xun1,2,LI Ge3,LI Qingmei2,LÜ Rongzhou1,2,MENG Zekun1,2,CHAI Shujun2,YANG Jifei2,GUO Junqing2,ZHANG Gaiping1,2,4
摘要: H7N9亚型禽流感病毒(AIV)的快速进化与变异使得其逃脱现有抗体的识别,为提供H7亚型AIV鉴别诊断所需重要材料,制备可识别H7亚型AIV HA蛋白的单克隆抗体(mAb)。采用差速离心法纯化的H7N9亚型AIV(A/Chicken/Guangdong/SW154/2015)免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,采用血凝抑制(HI)试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接ELISA检测方法筛选阳性杂交瘤细胞株。结果显示,获得5株稳定分泌抗H7N9 AIV HA蛋白mAb的杂交瘤细胞,腹水ELISA效价均为1∶1 000 000;其中,4株mAb的重链为IgG1,1株mAb的重链为IgG2b,轻链均为κ链。特异性测定结果显示,5株mAb仅与H7亚型AIV反应,不与其他亚型流感病毒发生反应;广谱性测定结果显示,5株mAb均可与不同年份分离出的H7亚型AIV发生反应;HI结果显示,腹水针对H7-Re3抗原株的HI效价为7 log2 ~12 log2;MDCK细胞微量中和试验结果显示,5株mAb均具有中和活性;Dot blot检测结果显示,5株mAb均可识别H7-Re2抗原株和H7-Re3抗原株;Western blot检测结果表明,5株杂交瘤细胞培养上清均在63 ku附近出现1条特异性的蛋白质条带,说明这5株mAb均识别线性表位。综上,成功制备了5株广谱性识别H7 AIV HA蛋白的单克隆抗体。
中图分类号: