动物新型疫苗专题

    Please wait a minute...
    选择: 显示/隐藏图片
    1. 猪流行性腹泻病毒S1 蛋白的免疫原性评估
    陈维聪, 刘运超, 周川杰, 杨苏珍, 魏蔷, 柴书军, 张改平
    河南农业科学    2022, 51 (11): 127-134.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.11.015
    摘要107)      PDF (6470KB)(88)    收藏
    为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显示,与对照组(PBS)相比,重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠血清中特异性IgG抗体水平显著提升;二免后14 d,果蝇细胞重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠的中和抗体效价达到1∶320;免疫后小鼠脾脏淋巴细胞具有更强的增殖能力;外周血CD3 +T细胞百分比显著增加,CD4 +/CD8 +T细胞比值高于对照组;小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平显著上升。综上,成功表达了重组PEDV S1蛋白,其可以诱导小鼠产生高效价的中和抗体,促进细胞免疫应答。
    参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    2. 嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182 的原核表达、纯化与免疫原性研究
    简思杰, 晁嘉, 孙薇, 陈锐, 丁锐, 陈琛, 刘祥
    河南农业科学    2022, 51 (11): 135-144.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.11.016
    摘要96)      PDF (9000KB)(33)    收藏
    为探究嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182的免疫原性,依据AHA1182氨基酸序列,采用生物信息学分析嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、简氏气单胞菌、多样气单胞菌、舒氏气单胞菌、产碱普罗维登斯菌以及爱德华氏菌之间的亲缘关系;构建AHA1182原核表达菌株并确定最佳诱导表达条件;采用包涵体洗涤及SDS-PAGE 切胶纯化方法获得AHA1182 蛋白并免疫红鲫;利用Western blot 检测红鲫抗AHA1182蛋白血清的特异性与效价;采用酶联免疫吸附(ELISA)法模拟红鲫抗AHA1182蛋白抗体血清与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;通过测定酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)活性与细胞吞噬作用,评价非特异性免疫;利用组织病理学切片探究AHA1182 蛋白免疫对红鲫内脏的影响。结果显示,AHA1182蛋白家族在不同菌株间均具有亲缘性,尤其在气单胞菌间亲缘关系较近,由此推测,AHA1182蛋白抗血清具有交叉免疫保护作用;成功克隆、表达、纯化AHA1182,最佳诱导条件:菌液浓度OD 600=1.0,IPTG终浓度为0.5 mmol/L,在28℃条件下诱导8 h;红鲫AHA1182蛋白抗血清具有良好的特异性,AHA1182蛋白抗体与嗜水气单胞菌特异性结合(滴度可达1∶3 200);AKP、ACP、细胞吞噬作用均显示,AHA1182蛋白可激活红鲫非特异性免疫。从组织病理学切片可以看出,AHA1182蛋白对红鲫内脏结构无影响。综上,嗜水气单胞菌AHA1182蛋白具有良好的免疫原性。
    参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    3. 2020—2021 年市售马立克病疫苗的效价测定及质量评估
    郑鹿平, 滕蔓, 刘金玲, 罗琴, 楚钰淑, 王伟东, 张文凯, 罗俊
    河南农业科学    2022, 51 (6): 134-143.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2022.06.015
    摘要277)      PDF (3380KB)(91)    收藏
    为了解和评估现有鸡马立克病(MD)疫苗的质量,采用间接免疫荧光试验(IFA)对2020—2021年市场销售的9家不同企业生产的11个批次MD疫苗产品进行病毒效价测定和对比分析,同时用ELISA试剂盒、胶体金试纸条或RT-PCR 方法分别对禽白血病病毒(ALV)和禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的污染状况进行检测。结果表明,在所检测的MD液氮苗中,3批进口或国产的CVI988单价液氮苗之间病毒效价无显著差异,2批不同品牌814单价液氮苗效价差异显著( P<0.05),2批不同品牌双价液氮苗(CVI988+HVT或814+HVT)病毒效价差异极显著( P<0.01),但上述全部类型液氮苗产品的病毒效价均大于5 500 PFU/羽份,达到国标规定值2倍以上。然而,4批不同品牌HVT冻干苗的病毒效价均远低于产品说明书标注的2 000 PFU/羽份,仅为83.90~109.50 PFU/羽份。全部MD 疫苗产品的ALV和REV检测结果均为阴性,表明这些产品洁净无污染。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    4. 鸡白痢沙门菌ssaV 基因缺失株的构建及其生物学特性分析
    徐冠冰, 王利平, 崔素宁, 张震, 梁雪瑞, 赵洁, 段艳红, 潘鹏涛, 李雪华, 殷俊磊, 职丽娟
    河南农业科学    2021, 50 (11): 139-145.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.11.016
    摘要307)      PDF (1993KB)(75)    收藏
    为探究 ssaV基因对鸡白痢沙门菌致病性的影响,利用同源重组技术,以pKD3质粒为模板,设计同源臂,扩增外源线性DNA片段,将该片段电转化入含有pKD46的鸡白痢沙门菌C79-13,丢失pKD46后,获得重组菌C79-13 ΔssaV∶∶Cm,将pCP20导入该重组菌,通过筛选获得ssaV 基因缺失株C79-13 ΔssaV,同时构建其回补株C79-13 ΔssaV(pBR322- ssaV),并对突变株C79-13 ΔssaV 的生长特性和生化特性、遗传稳定性及毒力等基本生物学特征进行分析。PCR 扩增和测序结果显示,成功构建了缺失株C79-13 ΔssaV,野生株C79-13、缺失株C79-13 ΔssaV 和回补株C79-13 ΔssaV(pBR322- ssaV)呈现出一致的生长特性和生化特性,突变株C79-13 ΔssaV 的遗传稳定性良好,其在雏鸡体内的定殖能力降低,且口服攻毒后,缺失株C79-13 ΔssaV对雏鸡半数致死量(LD50)至少是野生株(C79-13)的100倍。以上结果表明, ssaV基因与鸡白痢沙门菌的致病性相关,其缺失会明显降低鸡白痢沙门菌的毒力。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    5. 携带NDV HN 基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统构建及其生物学特性分析
    宋敏杰, 周小双, 石胜丽, 朱文文, 田文静, 程相朝, 郁川
    河南农业科学    2021, 50 (10): 116-123.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.10.015
    摘要176)      PDF (1438KB)(142)    收藏
    为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin‑neuraminidase protein, HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T- HN 中扩增出NDV HN 基因,并将其克隆入载体pYA3493- sopE Nt100 ,构建重组载体pYA3493- sopE Nt100-HN,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌Δ crpΔ asd SL1344,并对其重组菌的生长特性、遗传稳定性、表达特性和毒力特性等进行分析。结果显示,携带NDV HN 基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493-sopENt100- HN)构建成功;重组菌Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493- sopE Nt100- HN)的生长趋势与互补菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493- sopE Nt100)和缺失菌Δ crpΔ asd SL1344相似,与亲本菌株SL1344有明显差异;重组菌能够稳定表达HN 基因;减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统能够有效递呈HN 基因,并诱导其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)内表达;重组菌的LD50与互补菌和缺失菌没有明显差异,与亲本菌株SL1344差异较大。以上结果表明,成功构建了携带NDV HN 基因的新型减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493- sopENt100- HN),能够有效递呈NDV HN 基因并使其高效表达,且安全性高,遗传稳定。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    6. 中和表位串联的PCV2b 病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达与鉴定
    任春晓, 冯华, 张腾, 蒋敏, 刘运超, 金前跃, 张改平
    河南农业科学    2021, 50 (7): 154-160.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.07.018
    摘要217)      PDF (6014KB)(222)    收藏
    为了研究一种高效的预防猪圆环病毒2b亚型(PCV2b)感染的亚单位疫苗,针对其主要免疫原Cap 蛋白的基因进行分析,将Cap蛋白上重要中和表位226LKDPPLNP233以重复串联的方式连接于cap 基因C 端(capE2),并构建于pFastBacTMⅠ载体上,借助昆虫杆状病毒表达系统进行表达,利用SDS-PAGE、 Western blot分析和动态光散射及透射电镜观察等对重组蛋白CapE2进行鉴定。将纯化的CapE2蛋白免疫小鼠,同时以未连接中和表位的Cap蛋白、PCV2亚单位疫苗和PBS为对照,收集免疫血清分析目的重组蛋白的免疫原性以及连接中和表位对Cap蛋白免疫原性的影响。结果表明,Cap及CapE2蛋白成功在 sf21细胞内表达;纯化后的目的蛋白能够有效地与PCV2单克隆抗体产生特异性反应,并且可以在体外自组装形成均一的、直径约17 nm的病毒样颗粒;血清抗体检测结果显示,在第2次免疫后,CapE2免疫组抗体水平迅速提高,并在3免之后显著高于其他免疫组;中和抗体测定结果表明,Cap及CapE2组血清抗体效价均显著高于疫苗免疫对照组,且CapE2免疫组血清的中和效价可达1∶29。通过昆虫杆状病毒表达系统表达的连接2个中和表位的Cap蛋白,能自组装形成病毒样颗粒,并且具有较好的免疫原性,为PCV2感染的预防提供了新的疫苗候选。
    图表 | 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
    7. 表达 PCV2 Cap蛋白重组复制缺陷型腺病毒黏膜免疫效果
    邓祖丽颖, 刘雨丰, 马宁宁, 陈陆
    河南农业科学    2020, 49 (10): 143-148.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.10.020
    摘要70)      PDF (1494KB)(192)    收藏
    为研发高效的猪圆环病毒 2型(PCV2)黏膜疫苗,通过口服、肌内和滴鼻途径,将表达PCV2 Cap蛋白主要抗原表位的重组复制缺陷型腺病毒(rAd/Cap/518)免疫Balb/c小鼠,同时以无外源基因的空腺病毒(wild-rAd)经滴鼻途径免疫Balb/c小鼠作为对照组,分别检测小鼠血清中IgG和唾液、肺部、肠道灌洗液中IgA抗体水平,脾脏T淋巴细胞亚群及相关细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平以及淋巴结、脾脏和肺组织中PCV2病毒载量,评价其黏膜免疫效果。结果显示,与对照组相比,rAd/Cap/518经肌内途径免疫诱导产生的血清IgG抗体水平显著增加;经滴鼻和口服途径免疫诱导产生的局部黏膜部位IgA抗体水平显著增加。rAd/Cap/518经滴鼻、肌内和口服3种途径免疫诱导产生的CD3+T细胞百分率为46.60%~55.65%,经滴鼻免疫诱导产生的 CD3+CD4+T细胞百分率为34.43%~37.29%,经肌内和口服途径免疫诱导产生的CD3+CD4+T细胞百分率为 36.35%~41.58%,经滴鼻途径免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为12.39%~18.32%,经口服免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为16.29%,均显著高于对照组。rAd/Cap/518经滴鼻途径免疫后,能诱导小鼠脾脏和肠系膜淋巴细胞分泌IFN-γ。攻毒后免疫鼠体内病毒载量显著降低。综上,rAd/Cap/518经肌内途径免疫主要诱导全身性免疫应答,经滴鼻和口服途径免疫能诱导全身性和局部黏膜免疫应答,是一种很有前景的黏膜免疫候选疫苗。
    相关文章 | 多维度评价
    8. 新城疫病毒 HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定
    李旭锋, 王垚, 金前跃, 周稳, 柴永笑, 陈晓, 丁培阳, 张改平
    河南农业科学    2020, 49 (3): 145-150.   DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.03.019
    摘要108)      PDF (4383KB)(161)    收藏
    为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度。结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28 ℃条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5%甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90%的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰。综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰。
    相关文章 | 多维度评价