河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (10): 116-123.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.10.015
所属专题: 动物新型疫苗专题
宋敏杰1,周小双2,3,石胜丽2,朱文文1,田文静1,程相朝1,郁川1,2
SONG Minjie1,ZHOU Xiaoshuang2,3,SHI Shengli2,ZHU Wenwen1,TIAN Wenjing1,CHENG Xiangchao1,YU Chuan1
摘要: 为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin‑neuraminidase protein,HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T-HN 中扩增出NDV HN 基因,并将其克隆入载体pYA3493-sopENt100 ,构建重组载体pYA3493-sopENt100-HN,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌Δ crpΔ asd SL1344,并对其重组菌的生长特性、遗传稳定性、表达特性和毒力特性等进行分析。结果显示,携带NDV HN 基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)构建成功;重组菌Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)的生长趋势与互补菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-sopENt100)和缺失菌Δ crpΔ asd SL1344相似,与亲本菌株SL1344有明显差异;重组菌能够稳定表达HN 基因;减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统能够有效递呈HN 基因,并诱导其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)内表达;重组菌的LD50与互补菌和缺失菌没有明显差异,与亲本菌株SL1344差异较大。以上结果表明,成功构建了携带NDV HN 基因的新型减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统Δ crpΔ asd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN),能够有效递呈NDV HN 基因并使其高效表达,且安全性高,遗传稳定。
中图分类号: