马铃薯M病毒微滴数字PCR检测方法的建立

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (5): 69-74.

马铃薯M病毒微滴数字PCR检测方法的建立

刘晗¹，黄洁芳²，向均¹，燕照玲³，张永江^1*

（1.中国检验检疫科学研究院，北京 100176； 2.吴江出入境检验检疫局，江苏吴江 215200；3.河南省农业科学院农业经济与信息研究所，河南郑州 450002）

收稿日期:2017-11-30 出版日期:2018-05-15 发布日期:2018-05-15
通讯作者: 张永江(1977-)，男，山东潍坊人，研究员，博士，主要从事检验检疫工作。E-mail:zhangyjpvi@yeah.net
作者简介:刘晗(1983-)，男，山东莱西人，助理研究员，博士，主要从事检验检疫工作。E-mail:liuhan@caiq.gov.cn
基金资助:
“十三五”国家重点研发计划项目（2016YFF0203203）

Received:2017-11-30 Published:2018-05-15 Online:2018-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为了建立马铃薯M病毒（Potato virus M, PVM）的精准检测技术，根据PVM外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计微滴数字PCR（ddPCR）的引物、探针，建立PVM的ddPCR检测技术。以田间采集并经RT-PCR验证的PVM及其他4种同样可侵染马铃薯的病毒（PVX、PVY、CMV、TMV）总RNA为模板，进行ddPCR特异性分析；对PVM的总RNA进行10倍梯度稀释并用作模板，进行ddPCR灵敏度测定。结果表明，建立的ddPCR方法可以特异性地检测马铃薯上的PVM，与实时荧光RT-PCR结果一致；最低可检测5.7 fg/μL的总RNA，比实时荧光RT-PCR灵敏度高100倍。说明建立的ddPCR检测方法可用于PVM的准确鉴定。

关键词: 马铃薯, 马铃薯M病毒, 微滴数字PCR, 实时荧光RT-PCR, 检测

刘晗，黄洁芳，向均，燕照玲，张永江. 马铃薯M病毒微滴数字PCR检测方法的建立[J]. 河南农业科学, 2018, 47(5): 69-74.

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