河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (7): 19-22.

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小麦h型硫氧还蛋白Trx-h酵母双杂交诱饵载体的构建和自激活检测

  

  1. 河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,小麦玉米作物学国家重点实验室,国家小麦工程技术研究中心,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2014-02-09 出版日期:2014-07-15 发布日期:2014-07-15
  • 通讯作者: 尹钧(1957-),男,山西运城人,教授,博士,主要从事小麦生育生态、小麦高产栽培生物技术研究。E-mail:xmzxyj@126.com
  • 作者简介:曹玲珑(1988-),男,河南清丰人,在读硕士研究生,研究方向:作物分子改良。E-mail:caolldlss@sina.cn
  • 基金资助:

    国家转基因新品种培育重大专项(2011ZX08002-003);“十二五”农村领域国家科技计划项目(2012AA101105)

  • Received:2014-02-09 Published:2014-07-15 Online:2014-07-15

摘要:

为构建小麦Trx-h型硫氧还蛋白酵母双杂交诱饵载体,并检测其对酵母细胞的自激活作用。利用RT-PCR扩增TaTrx-h基因的ORF区域,并与pGBKT7载体连接构建诱饵载体pGBKT7-Trx-h,利用PEG/LiAC法转化酵母AH109后,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无自激活作用。结果表明,含pGBKT7-Trx-h质粒的酵母在SD/-Trp-Leu培养基上能正常生长,说明诱饵载体表达产物对酵母细胞无毒性作用;在SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上不能生长,说明诱饵质粒无自主激活报告基因的作用。因此,可以利用该诱饵载体通过酵母双杂交方法筛选与Trx-h蛋白相互作用的蛋白。

关键词: 小麦, 硫氧还蛋白, 酵母双杂, 诱饵载体, 自激活