塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.01.017

河南农业科学 ›› 2020, Vol. 49 ›› Issue (1): 123-127.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.01.017

塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

连凯琪，周玲玲，张明亮，张慢，王英杰，林正丹，宋玉伟

（安阳工学院生物与食品工程学院/河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室，河南安阳 455000）

收稿日期:2019-05-31 出版日期:2020-01-15 发布日期:2020-01-15
通讯作者: 张明亮（1985-），男，河南遂平人，讲师，博士，主要从事动物传染病诊断与防控。E-mail:mingliang90909@163.com
作者简介:连凯琪（1987-），男，河南新蔡人，讲师，博士，主要从事动物传染病诊断与防控。E-mail:liankaiqi616@163.com
基金资助:
国家自然科学基金青年基金项目(31802170)；河南省高等学校重点研发项目(19B230001)；安阳市科技发展计划项目(2018-123)；安阳工学院校青年科研基金项目(QJJ2018007)

Prokaryotic Expression and Purification of Seneca Valley Virus 3ABC Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

LIAN Kaiqi,ZHOU Lingling,ZHANG Mingliang,ZHANG Man,WANG Yingjie,LIN Zhengdan,SONG Yuwei

(School of Biotechnology and Food Science,Anyang Institute of Technology/Academician Workstation of Animal Disease Control and Nutrition Immunity in Henan Province/Henan Joint International Research Laboratory of Veterinary Biologics Research and Application,Anyang 455000,China)

Received:2019-05-31 Published:2020-01-15 Online:2020-01-15

摘要/Abstract

摘要： 为了开发塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV）的检测试剂盒，克隆3ABC基因进行原核表达和纯化，并将纯化的3ABC蛋白免疫大鼠，制备抗3ABC蛋白的多克隆抗体。通过Western blot鉴定制备的多克隆抗体与表达的3ABC蛋白的特异性识别能力，通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示，3ABC基因在大肠杆菌中大量表达，且主要以包涵体形式表达，重组蛋白分子质量约为55 ku，经纯化后得到单一条带。免疫大鼠制备的多克隆抗体效价大于1∶64 000，且与表达的3ABC重组蛋白发生特异性反应。综上，在大肠杆菌中成功表达了SVV 3ABC蛋白，且表达的重组蛋白具有免疫原性。

关键词: 塞尼卡谷病毒, 3ABC蛋白, 原核表达, 蛋白质纯化, 多克隆抗体

Abstract: In order to develop detective kits of Seneca Valley virus(SVV),the 3ABC gene was expressed in E.coli BL21(DE3) and purified,and the purified protein was used to immunize rats.The polyclonal antibody against 3ABC protein was prepared,and its titer was determined by ELISA.Specific reaction was identified between the prepared polyclonal antibody and the expressed 3ABC protein by Western blot.The results showed that the 3ABC gene could be expressed in E.coli(mainly in inclusion body).Molecular weight of the recombinant 3ABC protein was about 55 ku.SDS-PAGE analysis showed that there was a clear single target band for the purified 3ABC protein.The titer of the polyclonal antibody was detected to be higher than 1∶64 000 by indirect ELISA.The polyclonal antibody could specifically recognize the recombinant 3ABC protein.In conclusion,SVV 3ABC gene could be successfully expressed in E.coli and the recombinant 3ABC protein had good immunogenicity.

Key words: Seneca Valley virus, 3ABC protein, Prokaryotic expression, Protein purification, Polyclonal antibody

中图分类号:

S855.3

连凯琪, 周玲玲, 张明亮, 张慢, 王英杰, 林正丹, 宋玉伟. 塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2020, 49(1): 123-127.

LIAN Kaiqi, ZHOU Lingling, ZHANG Mingliang, ZHANG Man, WANG Yingjie, LIN Zhengdan, SONG Yuwei. Prokaryotic Expression and Purification of Seneca Valley Virus 3ABC Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibodies[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2020, 49(1): 123-127.

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塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

Prokaryotic Expression and Purification of Seneca Valley Virus 3ABC Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

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