山葡萄类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的表达分析

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (11): 95-98.

山葡萄类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的表达分析

陈蒙，袁赫海，杨铭慧，张宇，刘海峰^*

（延边大学农学院，吉林延吉 133002）

收稿日期:2018-06-15 出版日期:2018-11-15 发布日期:2018-11-15
通讯作者: 刘海峰（1974-），男，吉林延吉人，博士，副教授，主要从事山葡萄分子遗传学研究。E-mail：Liufeng_1989@163.com
作者简介:陈蒙（1992-），女，吉林公主岭人，在读硕士研究生，研究方向：山葡萄分子遗传学。E-mail：1055284082@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31260067）；吉林省教育厅“十三五”科学技术研究项目（吉教科合字［2016］第255号）；延边大学大学生创新创业训练资助项目

Received:2018-06-15 Published:2018-11-15 Online:2018-11-15

摘要/Abstract

摘要： 为了探究VAm3GT蛋白表达和在山葡萄体内酶学特征及生物学功能，进一步证实克隆所获得目的基因的准确性。利用实时定量PCR法对山葡萄果皮8个不同转色时期类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因（VAm3GT）的表达量进行了分析，并通过双酶切、连接转化等方法将VAm3GT基因克隆到原核表达载体pET28a上，构建原核表达重组质粒pET28a-VAm3GT。重组质粒转化至E.coliBL21后经不同浓度的IPTG诱导，通过SDS-PAGE分析表明，在适宜的IPTG诱导浓度下，VAm3GT基因在大肠杆菌BL21中得到高效表达，表达的融合蛋白分子质量约为50.19 ku，成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词: 山葡萄, 山葡萄类黄酮-3-O葡萄糖基转移酶基因, 实时荧光定量, 原核表达

陈蒙，袁赫海，杨铭慧，张宇，刘海峰. 山葡萄类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的表达分析[J]. 河南农业科学, 2018, 47(11): 95-98.

参考文献

参考文献:
[1]宋润刚,艾军,李晓红,等.中国山葡萄产业的发展及对策［J］.中外葡萄与葡萄酒,2009 (11):64-69.

［2］熊燕,张万民.中国野生葡萄抗寒研究利用［J］.安徽农业科学,2007,35(11):3238-3239.

［3］Holton T A,Comish E C.Genetics and biochemistry of anthocyanin biosynthesis［J］.The Plant Cell,1995,7(7):1071-1083.

［4］Harbome J B,Williaxns C A.Advances in flavonoid research since 1992［J］.Phytochemistry,2000,55(6):481-504.

［5］徐开生.中国马铃薯加工业现状及发展对策［J］.农产品加工,2007(9):55-57.

［6］武新娟,魏峭嵘,石瑛,等. 马铃薯抗逆基因Fe-SOD的克隆与序列分析［J］. 东北农业大学学报,2009,40(4):17-20.

［7］王慧聪,黄旭明,胡桂兵,等.荔枝果皮花青苷合成与相关酶的关系的研究［J］.中国农业科学,2004,37(12):2028-2032.

［8］王伟英,李海明,戴艺民,等.中国水仙类黄酮-3-O-葡糖基转移酶基因的原核表达［J］.福建农业学报,2016,31(8):816-819.

［9］孟蕊.苹果果皮色泽遗传特性及花青苷合成相关基因的表达分析［D］.杨凌：西北农林科技大学, 2017.

［10］祝钦泷.彩叶草（Solenostemon scutellarioides）叶色形成相关的花色素苷生物合成途径的分子调控研究［D］.重庆：西南大学,2007.

［11］王毅,赵能,原晓龙,等.滇牡丹类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的鉴定及表达分析［J］.基因组学与应用生物学,2017,36(4):1556-1562.

［12］王应丽,黄文俊,王瑛.箭叶淫羊藿EsUF3GT基因的克隆及表达分析［J］.植物科学学报,2014,32(6):602-611.

［13］王毅,王晨晨,周旭,等.七彩红竹中类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆及功能分析［J］.广西植物,2015,35(2):236-241,212.

［14］李明月,李艳军,张新宇,等.天然棕色棉葡萄糖苷转移酶基因Gh3的克隆与表达分析［J］.分子植物育种,2010,8(4):665-672.

［15］许志茹,佟玲,侯杰,等.芜菁UF3GT基因的克隆及表达特性［J］.生物技术通讯,2012,23(2):232-237,266.

［16］刘海峰,杨成君,于淼,等.山葡萄UDP-葡萄糖:类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因(3GT)cDNA的克隆和分析［J］.植物生理学通讯,2009,45(8):748-752.

［17］朱晓琴,金晓磊,冯永庆,等. 果树果实总RNA提取方法的改良研究［J］.北京农学院学报,2008(2):16-18.

［18］肖继坪,李俊,郭华春.彩色马铃薯类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因(3GT)的生物信息学和表达分析［J］.分子植物育种,2015,13(5):1017-1026.

［19］黄春辉,俞波,苏俊,等.‘美人酥’和‘云红梨1号’红皮砂梨果实的着色生理［J］.中国农业科学,2010,43(7):1433-1440.

［20］Owens C L.Pigments in Grape［M］.New York: Springer New York,2015:189-204.

［21］张琼,王红清,冷平,等.草莓果实发育过程中花色苷和黄酮醇类物质的形成机制［J］.园艺学报,2008,35(12):1735-1741.

［22］牟利,张鹍飞,李鹏,等.青稞F7-OMT基因的克隆及原核表达分析［J］.麦类作物学报,2016,36(1):18-26.

[1]	陈甜梦, 蔡彤璇, 王嘉璐, 田牧野, 赵宝华, 刘东. 嗜水气单胞菌外膜蛋白TolB 的原核表达及生物信息学分析[J]. 河南农业科学, 2024, 53(2): 136-143.
[2]	李鹏, 孙延举, 王寅彪, 金前跃, 梁晓晓, 银梅, 王选年, 刘兴友, 王利平. 猪圆环病毒3 型TB Green Ⅱ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用[J]. 河南农业科学, 2023, 52(3): 135-142.
[3]	徐佳, 孙怀昌. 牛支原体Vsp 蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备[J]. 河南农业科学, 2023, 52(12): 142-148.
[4]	路庆君, 罗竹星, 刘华伟, 魏梦, 王圆, 张照锋, 李游山. 家蚕丝腺中Abd-A 3 种剪接体的克隆、序列分析及原核表达[J]. 河南农业科学, 2022, 51(4): 138-150.
[5]	史东杰, 谭政, 张强, 伍仕弘, 魏东, 李文通, 王赛赛, 孙砚胜, 姜巨峰. 细胞色素CYP17a1 基因在锦鲤性腺不同发育时期的表达分析[J]. 河南农业科学, 2022, 51(2): 139-146.
[6]	简思杰, 晁嘉, 孙薇, 陈锐, 丁锐, 陈琛, 刘祥. 嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182 的原核表达、纯化与免疫原性研究[J]. 河南农业科学, 2022, 51(11): 135-144.
[7]	耿笑林, 孙杰, 王彦伟, 黄甜, 刘鹏, 曹红梅, 逄文强, 郝丽影, 邓均华, 黄玉欣, 田克恭. 非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2021, 50(8): 154-159.
[8]	王勋, 张雨杭, 孙亚宁, 李青梅, 李鸽, 王丽, 郭军庆, 邓瑞广, 张改平. CRISPR/Cas13a重组蛋白表达纯化及其连带剪切酶活性的鉴定[J]. 河南农业科学, 2021, 50(4): 147-153.
[9]	荣娜, 简思杰, 孙薇, 康超, 陈琛, 刘祥. 鱼类致病嗜水气单胞菌外膜蛋白TolC的原核表达及抗原性分析[J]. 河南农业科学, 2021, 50(3): 157-164.
[10]	谭政委, 李磊, 余永亮, 许兰杰, 杨红旗, 董薇, 鲁丹丹, 马新明, 梁慧珍. 红花1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因CtDXS1的克隆及表达分析 [J]. 河南农业科学, 2021, 50(2): 39-49.
[11]	刘艳阳, 武轲, 梅鸿献, 杜振伟, 崔承齐, 江晓林, 郑永战. 芝麻抗裂蒴基因SiIND1的克隆与原核表达[J]. 河南农业科学, 2020, 49(5): 63-68.
[12]	王雨, 王兆广, 刘泽军, 夏中曦, 范玉顶, 钟其旺. 黄鳝atrogin-1蛋白表达及细胞定位研究[J]. 河南农业科学, 2020, 49(5): 154-160.
[13]	滕蔓, 迟佳琦, 柴书军, 罗俊. 鸡LTBP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 河南农业科学, 2020, 49(12): 144-150.
[14]	连凯琪, 周玲玲, 张明亮, 张慢, 王英杰, 林正丹, 宋玉伟. 塞尼卡谷病毒3ABC蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2020, 49(1): 123-127.
[15]	张娴, 李超林, 郑乔木, 严子成, 廖海, 周嘉裕. 菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析[J]. 河南农业科学, 2019, 48(9): 74-81.