奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR 和LAMP检测方法的建立

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.02.016

摘要/Abstract

摘要： 为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎，进一步为该疾病提供更合理的治疗方案，分别以肺炎克雷伯菌16S-23S rDNA内部转录间隔层序列（Internal transcribed spacer，ITS）和脲酶UreD 基因为靶点，利用PCR技术和环介导等温扩增技术（Loop‑mediated isothermal amplification，LAMP）构建奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌快速鉴定方法。结果表明，利用PCR技术扩增ITS序列能准确鉴定出肺炎克雷伯菌，在核酸质量浓度为5×10^-2ng/μL的环境中依然能实现稳定扩增；利用LAMP技术扩增UreD基因的最佳反应温度为62℃，其最低检测核酸质量浓度为5×10^-7ng/μL，检测灵敏度是PCR方法的10⁵倍。综上，建立了PCR技术和LAMP技术快速鉴定奶牛乳房炎型肺炎克雷伯菌的方法，特异性强且灵敏度高。

关键词: 奶牛乳房炎, 肺炎克雷伯菌, UreD基因, PCR, LAMP

Abstract: The purpose of this study is to quickly identify dairy mastitis caused by Klebsiella pneumoniae，so as to provide most reasonable treatment plan for this disease.Rapid identification methods of Klebsiella pneumoniae were established using PCR and loop‑mediated isothermal amplification（LAMP）based on the internal transcribed spacer（ITS）sequence of 16S‑23S rDNA and urease UreD gene，respectively.The results showed that Klebsiella pneumoniae could be accurately identified by ITS gene sequence，and amplified stably when the nucleic acid concentration was 5×10^-2ng/μL.The optimal temperature and the lowest nucleic acid concentration by LAMP were 62℃ and 5×10^-7ng/μL，respectively，moreover，LAMP detection sensitivity was 10⁵ times that of PCR reaction. High‑specificity and ‑sensitivity rapid identification methods are established in this study using PCR and LAMP techniques，for dairy mastitis caused by Klebsiella pneumoniae.

Key words: Dairy mastitis, Klebsiella pneumoniae, UreD gene, PCR, Loop?mediated isothermal amplification（LAMP）

中图分类号:

S852.61

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