河南农业科学 ›› 2023, Vol. 52 ›› Issue (1): 134-143.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.01.014
王伟东1,2,3,滕蔓1,3,郑鹿平1,3,刘金玲1,3,张文凯1,3,4,李林燕1,3,4,张志会1,2,3,樊剑鸣2,罗俊1,3,4
WANG Weidong1,2,3,TENG Man1,3,ZHENG Luping1,3,LIU Jinling1,3,ZHANG Wenkai1,3,4,LI Linyan1,3,4,ZHANG Zhihui1,2,3,FAN Jianming2,LUO Jun1,3,4
摘要: 为探究病毒编码的微小RNA前体基因miR-M11对马立克病病毒(MDV)体外复制能力的影响,以MDV国内分离株HN302为研究对象,利用CRISPR/Cas9系统靶向编辑并敲除位于Mid基因簇的miRM11,构建1株miR-M11基因编辑缺失毒株HN302ΔM11(克隆号C58-8-4)。经过PCR鉴定、测序分析、间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR(qPCR)以及传代稳定性分析,证实HN302编码的miRM11被精确编辑并从病毒基因组中完全缺失,且未发生回复突变。病毒增殖曲线绘制结果显示,miRM11缺失毒株HN302ΔM11的增殖速度显著高于亲本毒株HN302(P<0.05)。综上,miR-M11是MDV复制的非必需基因,且其缺失后可增强MDV的体外复制能力。
中图分类号: