猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.01.018

河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (1): 142-151.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.01.018

猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

周新宇^1,2，陈鑫鑫²，乔松林²，郭振华²，李睿²，邓瑞广²，张改平^1,2

（1.河南农业大学动物医学院，河南郑州 450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002）

收稿日期:2020-06-28 出版日期:2021-01-15 发布日期:2021-01-15
通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，中国工程院院士，研究员，博士，主要从事动物免疫学及动物病毒分子致病机制研究。E-mail：zhanggaip@126.com
作者简介:周新宇（1996-），女，河南信阳人，在读硕士研究生，研究方向：预防兽医学。E-mail:1973539304@qq.com陈鑫鑫为同等贡献作者
基金资助:
河南省农业科学院杰出青年科技基金项目（2020JQ06）；河南省生猪产业体系创新团队项目（S2012-06）；现代农业（生猪）产业技术体系专项基金项目（CARS-35）

Establishment and Application of Real-time PCR for Differentiation of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strains NADC30-like and JXA1-R

ZHOU Xinyu^1,2,CHEN Xinxin²,QIAO Songlin²,GUO Zhenhua²,LI Rui²,DENG Ruiguang²,ZHANG Gaiping^1,2

(1.College of Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China;2.Key Laboratory of Animal Immunology,Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450002,China)

Received:2020-06-28 Published:2021-01-15 Online:2021-01-15

摘要/Abstract

摘要： 为鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株，根据类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株非结构蛋白2（Nsp2）基因序列差异，设计特异性引物和探针，建立TaqMan荧光定量PCR和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示，2种方法中，标准品在10³~10⁸ 拷贝/μL均具有良好线性关系，标准曲线R²值均在0.990以上；基于TaqMan探针法的荧光定量PCR方法，JXA1-R株、HNhx株的最低检出量分别为10⁴、10³ 拷贝/μL，SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的最低检出量均为100 拷贝/μL；重复性分析结果显示，批内和批间试验的变异系数均小于1.5%，呈现出良好重复性。综上，成功建立了鉴别检测类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株的方法，且稳定性好、特异性强，可以为PRRSV的鉴别检测提供技术支持。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒, JXA1-R疫苗株, HNhx毒株, TaqMan荧光定量PCR, SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR, 鉴别检测

Abstract: To distinguish JXA1-R vaccine strain and NADC30-like HNhx strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV),TaqMan real-time quantitative PCR and SYBR Green Ⅰ realtime quantitative PCR were established by using specific primers based on the difference of the regions of Nsp2 genes between HNhx and JXA1-R.The results indicated that the standard products had a good linear relationship in the range of 10³—10⁸copies/μL,and the R² of the standard curves were over 0.990 in two methods.The detection limit of the TaqMan-based fluorescent quantitative PCR was 10⁴copies/μL(JXA1-R) and 10³copies/μL(HNhx),respectively.The detection limit of SYBR Green Ⅰ fluorescent quantitative PCR was 100 copies/μL.The reproducibility of intra-and inter-assay displayed that the coefficient of variations was less than 1.5%,the repeatability was good.In conclusion,the method for differentiation of HNhx and JXA1-R was successfully established in this study, which exhibited good stability and high specificity, and provided a new technical support for the differential detection of PRRSV.

Key words: PRRSV, JXA1-R vaccine strain, HNhx strain, TaqMan real-time quantitative PCR, SYBR Green Ⅰ real-time quantitative PCR, Differential detection

中图分类号:

S852.65

周新宇, 陈鑫鑫, 乔松林, 郭振华, 李睿, 邓瑞广, 张改平. 猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用[J]. 河南农业科学, 2021, 50(1): 142-151.

ZHOU Xinyu, CHEN Xinxin, QIAO Songlin, GUO Zhenhua, LI Rui, DENG Ruiguang, ZHANG Gaiping. Establishment and Application of Real-time PCR for Differentiation of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strains NADC30-like and JXA1-R[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2021, 50(1): 142-151.

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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

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