河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (1): 142-151.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.01.018
周新宇1,2,陈鑫鑫2,乔松林2,郭振华2,李睿2,邓瑞广2,张改平1,2
ZHOU Xinyu1,2,CHEN Xinxin2,QIAO Songlin2,GUO Zhenhua2,LI Rui2,DENG Ruiguang2,ZHANG Gaiping1,2
摘要: 为鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株,根据类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株非结构蛋白2(Nsp2)基因序列差异,设计特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量PCR和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,2种方法中,标准品在103~108 拷贝/μL均具有良好线性关系,标准曲线R2值均在0.990以上;基于TaqMan探针法的荧光定量PCR方法,JXA1-R株、HNhx株的最低检出量分别为104、103 拷贝/μL,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的最低检出量均为100 拷贝/μL;重复性分析结果显示,批内和批间试验的变异系数均小于1.5%,呈现出良好重复性。综上,成功建立了鉴别检测类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株的方法,且稳定性好、特异性强,可以为PRRSV的鉴别检测提供技术支持。
中图分类号: