猪重要冠状病毒三重RT-RAA快速检测技术的建立

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2026.08.013

河南农业科学 ›› 2026, Vol. 55 ›› Issue (8): 125-135.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2026.08.013

猪重要冠状病毒三重RT-RAA快速检测技术的建立

郑昊天¹，张彪¹，从家豪¹，凌向辉¹，袁文举¹，黄慧慧¹，刘冠尚¹，陈兆江¹，师寒雪¹，吴宇轩¹，郭怡彤¹，袁晋^1,²，万博^1,2,3，郑关民⁴，张改平^1,2,3，张雨杭^1,2,3

（1.河南农业大学动物医学院/动物免疫学国家国际联合研究中心，河南郑州 450046；2.河南农业大学动物病原与生物安全教育部重点实验室，河南郑州 450046；3.河南省龙湖现代免疫实验室，河南郑州 450046；4.河南中医药大学医学院，河南郑州 450046）

收稿日期:2026-02-03 接受日期:2026-03-20 出版日期:2026-08-15 发布日期:2026-08-25
通讯作者: 张雨杭，讲师，博士，主要从事病原微生物与分子免疫学研究。E-mail：zyh7125@163.com
张改平，教授，博士，主要从事动物疫病机制、新型疫苗、免疫学检测技术研究。E-mail：zhanggaip@126.com
作者简介:郑昊天，在读本科生，研究方向：病原微生物与分子免疫学。E-mile：zhenghaotian1019@163.com
基金资助:
河南省科技研发计划联合基金项目（应用攻关类）（242103810004）；“ 十四五”国家重点研发计划项目（2023YFD1801302，2023YFD1801303）

Development of Triplex RT‐RAA Rapid Detection Technique for Important Swine Coronaviruses

Zheng Haotian¹，Zhang Biao¹，Cong Jiahao¹，Ling Xianghui¹，Yuan Wenju¹，Huang Huihui¹，Liu Guanshang¹，Chen Zhaojiang¹，Shi Hanxue¹，Wu Yuxuan¹，Guo Yitong¹，Yuan Jin^1,2，Wan Bo^1,2,3，Zheng Guanmin⁴，Zhang Gaiping^1,2,3，Zhang Yuhang^1,2,3

（1.College of Veterinary Medicine，Henan Agricultural University/International Joint Research Centre of National Animal Immunology，Zhengzhou 450046，China；2.Ministry of Education Key Laboratory for Animal Pathogens and Biosafety，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450046，China；3.Longhu Laboratory，Zhengzhou 450046，China；4.School of Medicine，Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China）

Received:2026-02-03 Accepted:2026-03-20 Published:2026-08-15 Online:2026-08-25

摘要/Abstract

摘要： 为应对猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）和猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）等临床症状相似的仔猪病毒性腹泻主要病原的鉴别难题，以这3种病毒高度保守的RdRp基因为靶标，分别设计并筛选出适用于重组酶介导等温扩增（Recombinase aided amplification，RAA）的特异性引物，建立了一种可同步检测PEDV、TGEV和PDCoV的三重RAA检测方法。结果表明，该体系在37 ℃恒温条件下反应10 min，经琼脂糖凝胶电泳即可检测到大小分别为137、289、170 bp的特异性扩增条带；对PEDV、TGEV和PDCoV的检测灵敏度分别为8.9、1.1、7.5 copies/μL，且与猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、猪星状病毒（Porcine astrovirus，PAstV）及猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）无交叉反应。应用该方法对93份临床样本进行平行比对测试，总体检出率为5.38%，与已报道的PEDV、TGEV、PDCoV单重定量PCR检测结果相比，符合率达100%，显示出良好的临床应用可靠性。综上，该方法为猪肠道冠状病毒的现场快速鉴别提供了一种精准、高效的新型检测工具。

关键词: 猪流行性腹泻病毒, 猪传染性胃肠炎病毒, 猪δ冠状病毒, 重组酶介导等温扩增, 多重检测

Abstract: To address the challenge of differentiating the major pathogens of viral diarrhea in piglets that cause similar clinical symptoms，including porcine epidemic diarrhea virus（PEDV），transmissible gastroenteritis virus（TGEV），and porcine deltacoronavirus（PDCoV），the highly conserved RdRp genes of these three viruses were used as the target. Specific primers suitable for recombinase‐aided amplification（RAA） were designed and screened，and a triplex RAA assay for the simultaneous detection of PEDV，TGEV，and PDCoV was established.The results showed that after reaction at 37 ℃ for 10 min，specific amplification bands of 137，289，170 bp could be detected by agarose gel electrophoresis.The detection limits for PEDV，TGEV，and PDCoV were 8.9，1.1，7.5 copies/μL，respectively，and no cross‐reactivity was observed with porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV），porcine astrovirus（PAstV），or classical swine fever virus（CSFV）.When applied to 93 clinical samples for parallel comparative testing，the overall detection rate was 5.38%.Compared with the results of previously reported singleplex quantitative PCR assays for PEDV，TGEV，and PDCoV，the coincidence rate reached 100%，demonstrating good clinical application reliability. In summary，this method offers an accurate and efficient new detection tool for the rapid field differentiation of porcine enteric coronaviruses.

Key words: Porcine epidemic diarrhea virus, Transmissible gastroenteritis virus, Porcine deltacoronavirus, Recombinase‐aided amplification, Multiplex detection

中图分类号:

S852.65

郑昊天, 张彪, 从家豪, 凌向辉, 袁文举, 黄慧慧, 刘冠尚, 陈兆江, 师寒雪, 吴宇轩, 郭怡彤, 袁晋, 万博, 郑关民, 张改平, 张雨杭. 猪重要冠状病毒三重RT-RAA快速检测技术的建立[J]. 河南农业科学, 2026, 55(8): 125-135.

Zheng Haotian, Zhang Biao, Cong Jiahao, Ling Xianghui, Yuan Wenju, Huang Huihui, Liu Guanshang, Chen Zhaojiang, Shi Hanxue, Wu Yuxuan, Guo Yitong, Yuan Jin, Wan Bo, Zheng Guanmin, Zhang Gaiping, Zhang Yuhang. Development of Triplex RT‐RAA Rapid Detection Technique for Important Swine Coronaviruses[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2026, 55(8): 125-135.

图/表 12

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