河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (12): 156-159.

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双酯型乌头碱完全抗原的制备与鉴定

 1,李 2,左伟勇1,王 1,王永娟1*   

  1. 1. 江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏 泰州 225300; 2.长春市环境监测中心站,吉林 长春 130011
  • 收稿日期:2014-06-12 出版日期:2014-12-15 发布日期:2014-12-15
  • 通讯作者: 王永娟(1980-),女,江苏海门人,副教授,博士,主要从事动物疫病防控研究。E-mail:43088591@qq.com
  • 作者简介:陆 辉(1975-),男,江苏通州人,副教授,硕士,主要从事生物工程技术研究。E-mail:smluhui@163.com
  • 基金资助:
     
    江苏农牧科技职业学院重点支持项目(NSFZD1305,NSFZD1405);江苏省博士后科研资助计划项目(1401077B);江苏省博士后日常资助项目(122340);江苏农牧科技学院“凤凰人才工程”项目;

  • Received:2014-06-12 Published:2014-12-15 Online:2014-12-15

摘要:  为制备双酯型乌头碱(DAC)的完全抗原,通过活化酯法将小分子的DAC偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA),合成免疫原DAC-BSA、检测原DAC-OVA,采用紫外扫描光谱法、BCA试剂盒法、酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果。结果表明,免疫原和检测原均偶联成功;按100μg/只的剂量每2周免疫一次小鼠,共免疫5次,最后一次免疫4d后,眼眶静脉采血,测定多抗血清的效价均达到1∶25 600,且第2组小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为30ng/mL,最低检出限为1ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于1%,具有很好的特异性。成功合成了DAC人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清。 

关键词: 乌头碱, 双酯型乌头碱, 活化酯法, 完全抗原, 制备, 鉴定