河南农业科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (5): 38-40.

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适于SDS-PAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

许克静,陈云,雷珍珍,程海丽,陈磊,乐超银*   

  1. 三峡大学 化学与生命科学学院,湖北 宜昌 443000
  • 收稿日期:2013-01-11 出版日期:2013-05-15 发布日期:2013-05-15
  • 通讯作者: 乐超银(1967-),女,湖北宜昌人,教授,博士,主要从事基因工程与生物防治研究。E-mail:yuechaoyin@163.com
  • 作者简介:许克静(1986-),女,河北保定人,在读硕士研究生,研究方向:植物生物技术。
  • 基金资助:
    湖北省自然科学基金项目(2011CDB184);宜昌市科学技术研究与开发项目(A09302-17)

  • Received:2013-01-11 Published:2013-05-15 Online:2013-05-15

摘要: 为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。

关键词: 高粱, SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 蛋白质提取, 样品制备