河南农业科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (3): 46-49.

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利用烟草的cDNA酵母表达文库筛选镉胁迫相关基因

李静1,2,王晶1,2,张美1*   

  1. 1.中国科学院 华南植物园/中国科学院植物资源保护与可持续利用重点实验室,广东 广州 510650;2.中国科学院大学,北京 100049
  • 收稿日期:2012-10-23 出版日期:2013-03-15 发布日期:2013-03-15
  • 通讯作者: 张美(1979-),女,河南辉县人,副研究员,博士,主要从事植物基因工程及植物发育分子生物学方面的研究。E-mail:zhangmei@scbg.ac.cn
  • 作者简介:李静(1987-),女,陕西白水人,在读硕士研究生,研究方向:生物化学与分子生物学。E-mail:lijing03120312@126.com
  • 基金资助:
    中国科学院植物资源保护与可持续利用重点实验室基金资助项目(201220zs)

  • Received:2012-10-23 Published:2013-03-15 Online:2013-03-15

摘要: 为了鉴定烟草在重金属镉胁迫处理下的功能基因,构建烟草cDNA酵母表达文库,并利用镉敏感的突变株对文库进行初步筛选。首先将烟草幼苗进行重金属胁迫处理,然后取幼根提取总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成双链cDNA,将cDNA与入门载体pDONR222的同源重组区连接,再转到酵母表达载体pDEST22上,构建了Gateway技术兼容的酵母cDNA表达文库。经检测,构建的cDNA酵母表达文库滴度为4.32×106 cfu/mL,库容量为0.86×107 cfu,平均插入片段长度大于1kb,文库质量较高。通过镉敏感酵母突变株Δycf1筛选烟草重金属镉胁迫相关基因,获得酵母单克隆70个。经分析可知,其涉及到谷胱甘肽转移酶、铜分子伴侣及甲硫蛋白等24个不同蛋白基因,初步鉴定为烟草应答重金属镉胁迫的候选基因。 

关键词: 烟草, 重金属, 镉胁迫, cDNA文库, 功能基因