鸡4种主要RNA病毒病多重感染复合PCR检测方法的建立

河南农业科学 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (11): 105-109.

鸡4种主要RNA病毒病多重感染复合PCR检测方法的建立

刘媛¹，李学伍²，王丽²，谷雨³，王林建³

（1.河南科技大学动物科技学院，河南洛阳 471023； 2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002； 3.河南农业大学生物工程学院，河南郑州 450002）

收稿日期:2016-05-20 出版日期:2016-11-15 发布日期:2016-11-15
作者简介:刘媛（1991-），女，河南漯河人，在读硕士研究生，研究方向：分子病原学和免疫学。E-mail：862424624@qq.com
基金资助:
公益性行业（农业）科研专项（201303033）

Received:2016-05-20 Published:2016-11-15 Online:2016-11-15

摘要/Abstract

摘要： 依据GenBank中注册的禽流感病毒（AIV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒（IBDV）基因组核苷酸序列，通过序列比对获得AIV、IBV、NDV、IBDV的相对保守序列。根据每种病毒的保守序列利用生物学软件分别设计3对特异性引物，4种病毒共设计12对引物，并对12对引物进行模拟筛选，获得匹配最佳的4对引物。对获得的最佳匹配引物进行单项PCR验证，优化复合PCR反应条件，确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶使用量；经特异性、敏感性及简化PCR试验，最终建立了简易复合PCR检测方法。结果表明，建立的检测方法可同时扩增出4条大小与设计相符的特异性片段，即IBV（146 bp）、NDV（215 bp）、IBDV（345 bp）、AIV（435 bp）；建立的复合PCR方法具有较强的敏感性和特异性，能检测出100 pg AIV、IBV、IBDV的cDNA和100 fg NDV的cDNA；将三温热循环改进为二温热循环，即将退火和延伸过程合为一步（62 ℃），大大缩短了反应时间。

关键词: , 禽流感病毒, 鸡传染性支气管炎病毒, 新城疫病毒, 传染性法氏囊病毒, RNA病毒, 复合PCR

刘媛，李学伍，王丽，谷雨，王林建. 鸡4种主要RNA病毒病多重感染复合PCR检测方法的建立[J]. 河南农业科学, 2016, 45(11): 105-109.

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