河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (6): 128-131.

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猪伪狂犬病毒野毒株SYBR Green I实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

  

  1. 贵州省畜牧兽医研究所,贵州 贵阳 550005
  • 收稿日期:2014-02-20 出版日期:2014-06-15 发布日期:2014-06-15
  • 通讯作者: 谭诗文(1956-),男,贵州天柱人,研究员,本科,主要从事兽医分子生物学工作。E-mail:tswleiden@sina.com

  • Received:2014-02-20 Published:2014-06-15 Online:2014-06-15

摘要: 根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得PRV gE基因片段,构建重组质粒pMD–18T–gE,作为阳性标准品。对SYBR Green I 实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立猪PRV SYBR Green I实时荧光定量PCR诊断方法,研制诊断试剂盒。扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰,无引物二聚体,对猪圆环病毒(PCV–2)、猪细小病毒(PPV)、PRV(gE基因缺失株)、猪源E.coli、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV) 均无阳性信号扩增,且重复性好,灵敏度可达2.3×10拷贝/µL。 结果表明,研制的PRV野毒株SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒特异 灵敏、快速、重复性好,适于伪狂犬病毒临床样品的检测。

关键词: 猪伪狂犬病毒, 野毒株, gE基因, 荧光定量PCR, 诊断试剂盒