河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (10): 67-73.

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一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌(Alternaria alternata)的巢式PCR方 

 秦 召1,2,李巧云1*,段宗彪1,姜玉梅1,牛吉山1**   

  1. 1.河南农业大学 国家小麦工程技术研究中心,河南 郑州 450002;2.河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2014-03-27 出版日期:2014-10-15 发布日期:2014-10-15
  • 通讯作者: 牛吉山 (1965-),男,山西阳城人,研究员,博士,主要从事小麦抗病遗传与分子育种研究。E-mail: jsniu@263.net
  • 作者简介:秦 召(1988-),男,河南新郑人,在读硕士研究生,研究方向:小麦抗病性遗传。E-mail:qinzhao505@163.com
  • 基金资助:
     
     863计划项目(2012AA101105);河南省重大科技攻关项目(122101110200)

  • Received:2014-03-27 Published:2014-10-15 Online:2014-10-15

摘要: 为建立检测小麦中链格孢菌(Alternaria alternata)的方法,从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势A.alternata病原菌株,对其rDNA的内部转录间隔区序列(ITS)进行测序,序列比较表明,分离到的病原菌株与GenBank公布的A.alternata的ITS区序列一致性达到99%~100%。根据Alternaria属菌株(A.alternata、A.tenuis、A.tenuissima)和麦类根腐离蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)的ITS序列比对结果,设计出1对A.alternata特异性引物Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证,只有在A.alternata中能特异性地扩增出1条443bp的DNA片段。以真菌通用引物ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R为内侧引物进行巢式PCR扩增,能检测到A.alternata DNA的最低质量浓度为50pg/μL。因此,建立的巢式PCR方法能够快速、特异地检测小麦中的A.alternata。

关键词: 小麦, 链格孢菌, 检测, 巢式PCR