重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞及重组蛋白表达策略的优化

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (8): 118-122.

重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞及重组蛋白表达策略的优化

李文丽¹，刘霞^1*，刘在新²，卢曾军²，范朋举²

（1. 甘肃农业大学生命科学技术学院，甘肃兰州 730070； 2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州 730046）

收稿日期:2018-02-28 出版日期:2018-08-15 发布日期:2018-08-15
通讯作者: 刘霞（1975-），女，甘肃兰州人，副教授，博士，主要从事动物遗传与分子生物学研究。E-mail：liux@gsau.edu.cn
作者简介:李文丽（1991-），女，甘肃会宁人，在读硕士研究生，研究方向：动物生物化学与分子生物学。E-mail：1406523498@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金（31172336）

Received:2018-02-28 Published:2018-08-15 Online:2018-08-15

摘要/Abstract

摘要： 为确定嵌合口蹄疫病毒（FMDV）中和表位的猪细小病毒（PPV）衣壳蛋白在昆虫细胞（Sf-9）中的最佳表达条件。通过对比悬浮培养和贴壁培养2种培养条件，探究Sf-9细胞的最佳培养方式；利用血球计数板每隔24 h进行细胞计数，绘制Sf-9细胞生长曲线；将P1代重组病毒传代至P3代，提取重组病毒基因组DNA，进行PCR鉴定，检测插入目的基因的完整性；通过研究感染复数（MOI）和感染时间的关系来摸索重组病毒最佳感染条件，以获得高滴度的重组病毒；利用Western blot检测目的蛋白的表达量并探究重组蛋白的最佳表达条件。结果表明，悬浮培养的Sf-9细胞大小均一、边缘整齐，生长状态良好；PCR鉴定结果表明，插入的FMDV中和表位基因完整，可以进行重组蛋白的表达；Western blot结果显示，重组蛋白同时与FMDV阳性血清和PPV阳性血清产生特异性反应，进一步证明了插入的FMDV中和表位的存在；重组蛋白最佳表达条件是以10个MOI病毒液感染悬浮Sf-9细胞，在72 h时重组蛋白表达量最大。

关键词: 口蹄疫病毒, 猪细小病毒, 中和表位, 杆状病毒载体表达系统, 昆虫细胞

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