河南农业科学 ›› 2023, Vol. 52 ›› Issue (3): 135-142.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.03.015
李鹏1,孙延举2,王寅彪3,金前跃4,梁晓晓5,银梅2,王选年1,刘兴友1,王利平1
LI Peng1,SUN Yanju2,WANG Yinbiao3,JIN Qianyue4,LIANG Xiaoxiao5,YIN Mei2,WANG Xuannian1,LIU Xingyou1,WANG Liping1
摘要: 为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证。结果显示,建立的TBGreenⅡqPCR检测方法特异性良好,在4.74×102~4.74×107拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R2=0.999)。建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33%~0.62%,组间变异系数为0.40%~0.73%。对收集的132份临床样品进行检测,PCV3TBGreenⅡqPCR方法检出率为9.10%(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55%,6/132)。综上,建立的PCV3 TBGreen Ⅱ qPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等。
中图分类号: