猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (5): 137-140,144.

猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

王蕊^1,2，张改平²，乔松林²，刘永晖^1,2，蒋志政^1,2，万博²，鲍登克²，王爱萍^1*

1.郑州大学生物工程系，河南郑州 450001；2.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002

收稿日期:2012-01-17 出版日期:2012-05-15 发布日期:2012-05-15
通讯作者: 王爱萍(1970-)，女，青海西宁人，教授，主要从事动物免疫学研究。E-mail：pingaw@126.com
作者简介:王蕊（1987-），女，河南南阳人，在读硕士研究生，研究方向：病毒分子致病机制。E-mail：mengyu25129@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(30730068);河南省重大科技攻关计划项目(082101510002)

Received:2012-01-17 Published:2012-05-15 Online:2012-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。

关键词: , 猪, 实时荧光定量PCR, IFN-&beta, 基因, IRF-3基因

王蕊，张改平，乔松林，刘永晖，蒋志政，万博，鲍登克，王爱萍. 猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 河南农业科学, 2012, 41(5): 137-140,144.

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