地黄灼烧病毒RT-LAMP 快速检测方法的建立与应用

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2026.02.009

河南农业科学 ›› 2026, Vol. 55 ›› Issue (2): 80-88.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2026.02.009

地黄灼烧病毒RT-LAMP 快速检测方法的建立与应用

鲁书豪¹，文艺¹，高素霞¹，李雪梦¹，杨瑾¹，李绍建¹，李想¹，徐国豪¹，齐红志²，王飞¹，秦艳红¹

（1.河南省农业科学院植物保护研究所，河南郑州 450002；2.河南省农业科学院农业信息技术研究所，河南郑州 450002）

收稿日期:2025-04-22 接受日期:2025-06-06 出版日期:2026-02-15 发布日期:2026-03-09
通讯作者: 王飞，副研究员，在读博士研究生，主要从事药用植物保护研究。E-mail：yunfeiren@163.com 秦艳红，研究员，博士，主要从事药用植物保护研究。E-mail：qinyanhong6040@163.com
作者简介:鲁书豪，研究实习员，硕士，主要从事药用植物保护研究。E-mail：lushuhao0525@163.com
基金资助:
国家中药材产业技术体系项目（CARS-21）；河南省中药材产业技术体系项目（HARS-22-11-Z1）；河南省科技攻关项目（252102111114）

Establishment and Application of RT‑LAMP Rapid Detection Method for Rehmannia Torradovirus Virus

LU Shuhao¹，WEN Yi¹，GAO Suxia¹，LI Xuemeng1，YANG Jin¹，LI Shaojian¹，LI Xiang1，XU Guohao¹，QI Hongzhi²，WANG Fei¹，QIN Yanhong¹

（1.Institute of Plant Protection，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China；2.Agricultural Information Technology Institute，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China）

Received:2025-04-22 Accepted:2025-06-06 Published:2026-02-15 Online:2026-03-09

摘要/Abstract

摘要： 地黄灼烧病毒（Rehmannia torradovirus virus，ReTV）是首次在地黄上报道的新病毒，严重危害地黄田间生长。为建立快速检测ReTV 的反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP），以ReTV 外壳蛋白（Coat protein，CP）基因为靶标基因设计了4组特异性引物，利用电泳检测及可视化方法（加SYBR Green Ⅰ显色剂）进行引物筛选和RT-LAMP产物鉴定，同时以单一变量法优化RT-LAMP反应条件，以ReTV 重组质粒为模板检测特异性和灵敏度，并对田间地黄样品进行检测应用。结果表明，建立的ReTV RTLAMP 检测方法最适反应条件为65 ℃ 60 min；特异性检测结果表明，只有ReTV为模板显示阳性，与地黄上其他病毒无交叉反应；RT-LAMP灵敏度是常规RT-PCR的100倍，可检测到3.39×100拷贝/μL；在样品检测中RT-LAMP方法的阳性检出率（100%）高于常规RT-PCR方法（93.75%），表明RT-LAMP方法准确性高于常规RT-PCR方法。建立的RT-LAMP检测技术为ReTV的准确检测提供了快速、特异、简便的方法。

关键词: 地黄灼烧病毒, 地黄, 环介导等温扩增技术, 可视化检测

Abstract: Rehmannia torradovirus virus（ReTV）is a new virus first reported on Rehmannia glutinosa，which seriously endangers the growth of R.glutinosa in the field. In this study，four sets of specific primers were designed with ReTV coat protein gene as the target gene，and the RT‑LAMP detection technology of ReTV was established. Primer screening and RT‑LAMP product identification were performed using electrophoresis detection and visualization methods（with SYBR Green Ⅰ reagent）.At the same time，the RT‑LAMP reaction conditions were optimized by a single variable method.The ReTV recombinant plasmid was used as a template for specific detection and sensitivity comparison，and the field rehmannia samples were detected.The results showed that the optimal reaction condition for the established ReTV RT‑LAMP detection method was 65° C for 60 min.The specific detection results showed that only ReTV was positive as the template，and there was no cross reaction with other viruses on R.glutinosa. The sensitivity of RT‑LAMP was 100 times higher than that of conventional RT‑PCR.RT‑LAMP could detect 3.39×100 copies/μL.RT‑LAMP method had a 100% positive detection rate，and RT‑PCR method had a 93.75% positive detection rate，indicating that the accuracy of RT‑LAMP was better than that of RT‑PCR method. The RT‑LAMP detection technology established in this study provides a rapid，specific and simple method for the accurate detection of ReTV.

Key words: Rehmannia torradovirus virus, Rehmannia glutinosa, LAMP, Visual detection

中图分类号:

S435.672

鲁书豪, 文艺, 高素霞, 李雪梦, 杨瑾, 李绍建, 李想, 徐国豪, 齐红志, 王飞, 秦艳红. 地黄灼烧病毒RT-LAMP 快速检测方法的建立与应用[J]. 河南农业科学, 2026, 55(2): 80-88.

LU Shuhao, WEN Yi, GAO Suxia, LI Xuemeng, YANG Jin, LI Shaojian, LI Xiang, XU Guohao, QI Hongzhi, WANG Fei, QIN Yanhong. Establishment and Application of RT‑LAMP Rapid Detection Method for Rehmannia Torradovirus Virus[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2026, 55(2): 80-88.

图/表 6

参考文献

［1］刘占林，李建芳. 地黄属分子系统学分析［J］. 西北植物学报，2014，34（1）：77‑82.
LIU Z L，LI J F. Molecular phylogenetic analysis of Rehmannia［J］. Acta Botanica Boreali‑Occidentalia Sinica，2014，34（1）：77‑82.
［2］朱珏，朱香梅，石雨荷，等. 地黄的研究进展及其质量标志物的预测分析［J］. 中药材，2022，45（5）：1273‑1281.
ZHU J，ZHU X M，SHI Y H，et al. Research progress of Rehmannia glutinosa and prediction and analysis of its quality markers［J］. Journal of Chinese Medicinal Materials，2022，45（5）：1273‑1281.
［3］陈金鹏，张克霞，刘毅，等. 地黄化学成分和药理作用的研究进展［J］. 中草药，2021，52（6）：1772‑1784.
CHEN J P，ZHANG K X，LIU Y，et al. Research progress on chemical constituents and pharmacological actions of Rehmannia glutinosa［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2021，52（6）：1772‑1784.
［4］张紫怡，张来宾，吕洁丽. 地黄的主要化学成分及药理作用研究进展［J］. 新乡医学院学报，2024，41（10）：979‑986.
ZHANG Z Y，ZHANG L B，LÜ J L. Research progress on the main chemical constituents and pharmacological actions of Rehmannia glutinosa［J］. Journal of Xinxiang Medical University，2024，41（10）：979‑986.
［5］赵华，孙辉晶. 浅议地黄类中成药及其临床应用［J］. 中国医药指南，2009，7（24）：230‑231.
ZHAO H， SUN H J. A brief discussion on Rehmannia‑based patent medicines and their clinical applications［J］.Guide of China Medicine，2009，7（24）：230‑231.
［6］葛楠，闫广利，孙晖，等. 熟地黄药效物质基础研究进展［J］. 中草药，2023，54（1）：292‑302.
GE N，YAN G L，SUN H，et al. Research progress on effective constituents in Radix rehmanniae praeparata［J］.Chinese Traditional and Herbal Drugs，2023，54（1）：292‑302.
［7］周颖，张瑞，郭颂，等. 北京地区地黄花叶病病原的分子鉴定［J］. 植物保护学报，2010，37（5）：447‑452.
ZHOU Y， ZHANG R， GUO S， et al. Molecular identification of viral pathogens inducing Rehmannia glutinosa mosaic disease in Beijing［J］. Journal of Plant Protection，2010，37（5）：447‑452.
［8］QIN Y H，LU S H，WEN Y，et al. Genomic characterization and molecular detection of Rehmannia allexivirus virus，a novel Allexivirus infecting Rehmannia glutinosa［J］. Microorganisms，2024，12（5）：844.
［9］秦艳红，文艺，高素霞，等. 河南省地黄病毒病病原鉴定及主要病毒的分子变异分析［J］. 植物病理学报，2024，54（2）：469‑475.
QIN Y H，WEN Y，GAO S X，et al. Identification of the pathogens of Rehmannia glutinosa viral disease and molecular variation analysis of the major viruses［J］. Acta Phytopathologica Sinica，2024，54（2）：469‑475.
［10］QIN Y H，LU S H，WEN Y，et al. Genomic analysis of a novel Torradovirus Rehmannia torradovirus virus：Two distinct variants infecting Rehmannia glutinosa［J］. Microorganisms，2024，12（8）：1643.

［11］KWAK H R，GO W R，HONG S B，et al. One‑step multiplex RT‑PCR for simultaneous detection of four viruses infecting Rehmannia glutinosa［J］. Journal of General Plant Pathology，2020，86（2）：143‑148.

［12］NOTOMI T，OKAYAMA H，MASUBUCHI H，et al.Loop‑mediated isothermal amplification of DNA［J］.Nucleic Acids Research，2000，28（12）：E63.

［13］SARKES A，FU H T，FEINDEL D，et al. Development and evaluation of a loop‑mediated isothermal amplification（LAMP） assay for the detection of Tomato brown rugose fruit virus（ToBRFV）［J］. PLoS One，2020，15（6）：e0230403.

［14］赵芊，李文，李西柳，等. 基于LAMP技术的番茄灰霉病早期快速检测［J］. 河南农业科学，2025，54（6）：84‑91.

ZHAO Q，LI W，LI X L，et al. Early and rapid detection of tomato gray mold based on LAMP technology［J］.Journal of Henan Agricultural Sciences，2025，54（6）：84‑91.

［15］张民秀，谢芝勋，张艳芳，等. 鸡圆圈病毒3型可视化LAMP检测方法的建立及应用［J］. 河南农业科学，2024，53（4）：128‑136.

ZHANG M X，XIE Z X，ZHANG Y F，et al. A visual LAMP assay for detection of chicken gyrovirus 3［J］.Journal of Henan Agricultural Sciences，2024，53（4）：128‑136.

［16］罗阳，田唯嘉，何芳，等. 奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR和LAMP检测方法的建立［J］. 河南农业科学，2023，52（2）：145‑150.

LUO Y，TIAN W J，HE F，et al. Establishment of PCR and LAMP methods for detection of Klebsiella pneumoniae from dairy mastitis［J］. Journal of Henan Agricultural Sciences，2023，52（2）：145‑150.

［17］FUKUTA S，IIDA T，MIZUKAMI Y，et al. Detection of Japanese yam mosaic virus by RT‑LAMP［J］.Archives of Virology，2003，148（9）：1713‑1720.

［18］秦文韬，王忠跃，张昊. 环介导恒温扩增技术（LAMP）及其在植物病毒检测中的研究进展［J］. 中国农学通报，2013，29（21）：170‑174.

QIN W T，WANG Z Y，ZHANG H. The progress of loop‑mediated isothermal amplification（LAMP）and its application in detection of plant virus［J］. Chinese Agricultural Science Bulletin，2013，29（21）：170‑174.

［19］邵煜尊，张万红，王惠，等. 辣椒轻斑驳病毒RT-LAMP 快速检测方法的建立［J］. 中国蔬菜，2023（12）：42‑48.

SHAO Y Z，ZHANG W H，WANG H，et al.Establishment of a rapid RT‑LAMP detection method for pepper mild mottle virus［J］. China Vegetables，2023（12）：42‑48.

［20］王永江，周彦，李中安，等. 柑橘衰退病毒RT-LAMP快速检测方法的建立［J］. 中国农业科学，2013，46（3）：517‑524.

WANG Y J，ZHOU Y，LI Z A，et al. A RT‑LAMP assay for detection of Citrus tristeza virus［J］. Scientia Agricultura Sinica，2013，46（3）：517‑524.

［21］王凤丽，王飞，鲁传涛，等. 山药潜隐病毒RT-LAMP快速检测方法的建立［J］. 植物病理学报，2023，53（4）：743‑747.

WANG F L，WANG F，LU C T，et al. Establishment of RT‑LAMP rapid detection method for yam latent virus［J］. Acta Phytopathologica Sinica，2023，53（4）：743‑747.

［22］VARELA DE ANDRADE A，SARTORI PEREIRA F，NASCIMENTO DA SILVA F，et al.Validation and optimization of the loop‑mediated isothermal amplification（LAMP）technique for rapid detection of wheat stripe mosaic virus，a wheat‑infecting pathogen［J］.Journal of Genetic Engineering and Biotechnology，2024，22（2）：100373.

［23］MARRA M，MUSSANO P，PINTON E，et al. Rapid and specific detection of wheat spindle streak mosaic virus using RT‑LAMP in durum wheat crude leaf extract［J］.PLoS One，2024，19（2）：e0299078.

［24］ZHANG Y B，XIE Z K，FLETCHER J D，et al. Rapid and sensitive detection of lettuce necrotic yellows virus and cucumber mosaic virus infecting lettuce（Lactuca sativa L.）by reverse transcription loop‑mediated isothermal amplification［J］. The Plant Pathology Journal，2020，36（1）：76‑86.

［25］QIAO N，DAI H J，LIU J，et al. Detection of melon necrotic spot virus by one‑step reverse transcription loop‑mediated isothermal amplification assay［J］. PLoS One，2020，15（3）：e0230023.

［26］辛言言，刘洪义，杨长志，等. 番茄黑环病毒RT-LAMP 检测方法的建立［J］. 河南农业科学，2015，44（4）：88‑92.

XIN Y Y，LIU H Y，YANG C Z，et al. Detection of tomato black ring virus by loop‑mediated isothermal amplification ［J］. Journal of Henan Agricultural Sciences，2015，44（4）：88‑92.

［27］谈静惠，谢婷，张博文，等. 葡萄扇叶病毒RT-LAMP检测方法的建立［J］.植物检疫，2023，37（4）：8‑12.

TAN J H，XIE T，ZHANG B W，et al. Establishment of RT‑LAMP assay for detection of grapevine fanleaf virus［J］. Plant Quarantine，2023，37（4）：8‑12.

［28］秦艳红，鲁书豪，文艺，等. 地黄花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用［J］.植物保护，2024，50（6）：246‑253.

QIN Y H，LU S H，WEN Y，et al. Establishment and application of RT‑LAMP method for rapid detection of Rehmannia mosaic virus［J］.Plant Protection，2024，50（6）：246‑253.

［29］戴婷婷，陆辰晨，郑小波. 环介导等温扩增技术在病原物检测上的应用研究进展［J］.南京农业大学学报，2015，38（5）：695‑703.

DAI T T，LU C C，ZHENG X B. Application research progress of loop‑mediated isothermal amplification in the pathogenic microorganism［J］. Journal of Nanjing Agricultural University，2015，38（5）：695‑703.

［30］NAGAMINE K，HASE T，NOTOMI T. Accelerated reaction by loop‑mediated isothermal amplification using loop primers［J］. Molecular and Cellular Probes，2002，16（3）：223‑229.

［31］MAEDA H，KOKEGUCHI S，FUJIMOTO C，et al.Detection of periodontal pathogen Porphyromonas gingivalis by loop‑mediated isothermal amplification method ［J］. FEMS Immunology and Medical Microbiology，2005，43（2）：233‑239.

［32］RAIGOND B，VERMA A，ROACH S，et al. One‑step reverse transcription loop‑mediated isothermal amplification：A simple，sensitive and rapid assay for detection of potato virus X in potato leaves and tubers［J］.Indian Phytopathology，2019，72（2）：321‑328.

［33］CARUSO A G，RAGONA A，AGRÒ G，et al. Rapid detection of tomato spotted wilt virus by real‑time RT‑LAMP and in‑field application［J］. Journal of Plant Pathology，2024，106（2）：697‑712.

［34］秦艳红，鲁书豪，陈须琨，等. 烟草轻型绿花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用［J/OL］. 植物病理学报：1‑12（2024‑12‑03）［2025‑11‑21］. https：//doi. org/10. 13926/j. cnki. apps. 001360.

QIN Y H，LU S H，CHEN X K，et al. Establishment of RT‑LAMP rapid detection method for tobacco mild green mosaic virus［J/OL］. Acta Phytopathologica Sinica：1‑12（2024‑12‑03）［2025‑11‑21］. https：//doi.org/10.13926/j. cnki. apps. 001360.

［35］袁英哲，罗明，韩剑，等. 甜瓜种子中黄瓜花叶病毒和小西葫芦黄花叶病毒的RT-LAMP可视化检测方法［J］. 中国农学通报，2020，36（20）：107‑113.

YUAN Y Z，LUO M，HAN J，et al. Development of a reverse transcription loop‑mediated isothermal amplification assay for visual detection of cucumber mosaic virus and zucchini yellow mosaic virus in melon seeds［J］. Chinese Agricultural Science Bulletin，2020，36（20）：107‑113.
［36］王涌，曾祥国，肖桂林，等. 草莓白化伴随病毒RTLAMP检测方法的建立［J］. 植物保护，2024，50（6）：237‑245.
WANG Y，ZENG X G，XIAO G L，et al. Establishment of RT‑LAMP detection method for strawberry pallidosis‑associated virus［J］. Plant Protection，2024，50（6）：237‑245.
［37］张吉红，陈先锋，孙辉. 逆转录环介导等温扩增技术检测烟草环斑病毒的研究［J］. 植物病理学报，2014，44（6）：629‑633.
ZHANG J H，CHEN X F，SUN H. Research on detection of tobacco ringspot virus by RT‑LAMP［J］.Acta Phytopathologica Sinica，2014，44（6）：629‑633.
［38］尹新颖，曹际娟，李鑫，等. 基于免核酸提取可视化RT-LAMP快速检测黄瓜绿斑驳花叶病毒［J］. 植物保护，2023，49（2）：264‑271.
YIN X Y，CAO J J，LI X，et al. Rapid detection of cucumber green mottle mosaic virus based on visual RT‑LAMP without nucleic acid extraction［J］. Plant Protection，2023，49（2）：264‑271.

[1]	王飞, 李雪梦, 杨瑾, 郭治辰, 宋露洋, 秦艳红, 文艺, 高素霞, 鲁书豪, 刘琦, 齐红志, 李绍建. 贝莱斯芽孢杆菌Bv1-4 对3 种药材的防病促生效果评价及其全基因组分析[J]. 河南农业科学, 2025, 54(11): 79-90.
[2]	赵振兴, 范奇璇, 王思元, 董铮, 胡中泽, 张永江. 辣椒轻斑驳病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立[J]. 河南农业科学, 2024, 53(9): 80-87.
[3]	李海骋, 王繁珍, 姜永成, 宋欣, 陈招荣. 地黄叶斑病病原鉴定及室内药效检测[J]. 河南农业科学, 2024, 53(4): 92-101.
[4]	腊贵晓, 王林林, 郭军旗, 赵玉龙, 郭红霞, 贾慧, 杨铁钢. 地黄枯草芽孢杆菌全基因组测序及其促生作用相关基因研究[J]. 河南农业科学, 2024, 53(12): 75-85.
[5]	李春鑫, 张永战, 陈国参, 杨铁钢, 张英涛, 李春, 董诚明. 黄淮产区地黄种质遗传多样性分析及SSR指纹图谱构建[J]. 河南农业科学, 2022, 51(7): 61-74.
[6]	刘春琰, 黄勇, 郭猛, 张红瑞, 周艳, 李贺敏. 遮阴对地黄生长及生理特性的影响[J]. 河南农业科学, 2022, 51(4): 59-67.
[7]	赵迪, 杨阳, 陈立伟. 农作物生产三维可视化仿真系统设计与应用——以怀地黄为例[J]. 河南农业科学, 2022, 51(10): 169-180.
[8]	刘莉, 姚瑞, 徐越仁, 李慧向, 张梦丹, 胡圣伟. 绵羊GDF9基因G1突变可视化检测方法的建立[J]. 河南农业科学, 2020, 49(8): 136-142.
[9]	邵露营，周延清，杨珂，郭萌萌. 地黄磷酸丙糖异构酶基因的克隆与空间表达[J]. 河南农业科学, 2018, 47(11): 50-55.
[10]	李建军，王君，任美玲，尚星晨，孙树武，马文喜. 地黄新品系叶片色素及光合特性分析[J]. 河南农业科学, 2016, 45(7): 93-95,142.
[11]	田云鹤, 王丰青, 李明杰1 索艳飞, 李连珍, 张宝, 张重义. 不同地黄种质连作障碍效应分析[J]. 河南农业科学, 2015, 44(8): 98-103.
[12]	李建军，王君，任美玲，孙树武. 怀地81与主栽品种单株鲜质量和指标成分含量比较[J]. 河南农业科学, 2015, 44(3): 111-114.
[13]	姚锋，董诚明，柴茂，李洋，马玉华，王秀书. 怀地黄种栽质量分级标准研究[J]. 河南农业科学, 2014, 43(6): 120-122.
[14]	姚锋，董诚明，李洋，冷慕婵，马玉华，张延军. 不同复合肥对地黄产量和品质的影响[J]. 河南农业科学, 2014, 43(4): 56-59.
[15]	刘华，王晶，颜进项，罗强，张林西. 地黄多糖的超临界CO₂萃取及其对创伤小鼠脾脏的影响[J]. 河南农业科学, 2013, 42(6): 140-142，148.

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