河南农业科学 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (4): 122-125.

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猪伪狂犬病毒gD蛋白抗原表位的克隆及表达

刘 芳1,张 冲1,2,王寅彪2,赵 朴2,邓瑞广2,李学伍2*   

  1. 1.河南科技大学 动物科技学院,河南 洛阳 471003; 2.河南省农业科学院/河南省动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2015-11-20 出版日期:2016-04-15 发布日期:2016-04-15
  • 通讯作者: 李学伍(1964-)男,河南通许人,研究员,博士,主要从事动物病毒生物学研究。E-mail:lixuewu2002@126.com
  • 作者简介:刘 芳(1988-),女,河南洛阳人,在读硕士研究生,研究方向:畜禽疫病快速检测与防制。E-mail:346103828@qq.com
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31172348)

  • Received:2015-11-20 Published:2016-04-15 Online:2016-04-15

摘要: 依据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV) BJ/YT株gD基因设计引物,扩增gD蛋白抗原表位,其设计扩增长度为702 bp,将扩增片段克隆到pMD19-T载体获得pMD19-T-gD。 利用BamHⅠ和Hind Ⅲ限制性内切酶双酶切pMD19-T-gD质粒,进行琼脂糖凝胶电泳并回收酶切片段,将回收片段与原核表达载体pET-28a连接,成功构建了pET-28a-gD表达载体。将表达载体转化感受态细胞Rosetta,IPTG诱导表达后,进行SDS–PAGE电泳,结果显示,在25 ku处出现特异性蛋白质条带。Western blot分析结果表明,表达产物能够被PRV的阳性血清识别。综上,成功克隆并表达了gD蛋白抗原表位,且其表达产物具有较好的生物学活性。

关键词: 猪伪狂犬病病毒,  , gD基因, 抗原表位,  , 蛋白质表达