根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立

河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (9): 83-87.

根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立

赵冬梅，何佳昱^*，杨志辉，朱杰华^**，徐进

河北农业大学植物保护学院，河北保定 071000

收稿日期:2014-03-11 出版日期:2014-09-15 发布日期:2014-09-15
通讯作者: 朱杰华(1963-)，女，河北昌黎人，教授，博士，主要从事分子植物病理学研究。E-mail：zhujiehua356@126.com
作者简介:赵冬梅(1981-)，女，内蒙古呼和浩特人，在读博士研究生，研究方向：分子植物病理学。E-mail：zhaodongm03@126.com *共同第一作者：何佳昱(1990-)，女，河北石家庄人，在读硕士研究生，研究方向：植物病害流行与综合防治。E-mail：hejiayu.h@163.com
基金资助:

现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目（CARS-10-P12）

Received:2014-03-11 Published:2014-09-15 Online:2014-09-15

摘要/Abstract

摘要： 为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系,以菌株HK09-19为材料,从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮(AS)浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果,建立的转化体系条件为:以1.0 μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选,采用玻璃纸作为共培养介质,AS浓度为200 μmol/L,培养6d,温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50~60个转化子。随机选取10个转化子,利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增,转化子均能扩增出800bp左右的预期条带;同时,利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行PCR扩增,排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性;转化子继代培养5代后,仍能在含潮霉素B的黑麦培养基上生长。说明外源T-DNA已成功整合到致病疫霉基因组中,并能稳定遗传。

关键词: 致病疫霉, 根癌农杆菌介导的转化, T-DNA, 转化效率

赵冬梅，何佳昱，杨志辉，朱杰华，徐进. 根癌农杆菌介导致病疫霉转化体系的建立[J]. 河南农业科学, 2014, 43(9): 83-87.

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