河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (12): 134-139.
范 璐1，王 丽1，史西保1,2，樊剑鸣3，王爱萍4，张改平1,5*
收稿日期：2014-07-12
基金项目：国家自然科学基金项目（31302073）；河南省农业科学院自主创新专项基金
作者简介：范 璐（1986-），女，上海崇明人，在读硕士研究生，研究方向：动物病毒分子致病机制。
E-mail:632038636@qq.com
﹡通讯作者：张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，中国工程院院士，博士，主要从事动物免疫学与动物因病快速诊断研究。E-mail:zhanggaiping2003@yahoo.com.cn
摘要： 为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37%和11.51%,与对照组(20.25%)相比有所降低。综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用。
