鸡PD-1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定

河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (10): 112-116.

鸡PD-1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定

李博文^1,2，孙国鹏¹，王爱国^1,2，岳锋¹，张艳芳¹，朱艳平¹，银梅²，杨媛^1,2，郭东光¹，王选年^1,2

1. 新乡学院生命科学与技术系/生物技术研究中心，河南新乡 453003；2. 河南科技学院动物科学学院，河南新乡，453003

收稿日期:2014-05-19 出版日期:2014-10-15 发布日期:2014-10-15
通讯作者: 王选年（1969-），男，河南灵宝人，教授，博士，主要从事动物病理学与免疫学研究。E-mail:wangxuannian@163.com
作者简介:李博文( 1986-),男,河南灵宝人，在读硕士研究生, 研究方向：动物病理学与免疫学。E-mail:libowen5943@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31272539）

Received:2014-05-19 Published:2014-10-15 Online:2014-10-15

摘要/Abstract

摘要： 为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD-1)胞外区的生物学活性,根据GenBank中的鸡PD-1基因序列,经生物信息学比对分析,设计鸡PD-1胞外区特异性克隆引物,扩增目的基因,连接原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,并对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示,成功克隆了鸡PD-1胞外区基因;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,37℃、0.1mmol/L IPTG诱导4h时,PD-1胞外区融合蛋白表达量最高,以包涵体形式存在;流式细胞术分析结果表明,PD-1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。

关键词: 鸡, 程序细性细胞死亡因子1, 胞外区, 克隆, 原核表达, 生物学活性

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