霍乱弧菌中弧菌素合成酶VibF的A结构域基因的克隆、表达与纯化研究

河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (3): 149-153.

霍乱弧菌中弧菌素合成酶VibF的A结构域基因的克隆、表达与纯化研究

刘秀华^1,2，王执²，徐素娟^2*

1.河北大学生命科学学院，河北保定071002；2.山东大学微生物技术国家重点实验室，山东济南 250100

收稿日期:2011-12-03 出版日期:2012-03-15 发布日期:2012-03-15
通讯作者: 徐素娟（1972-），女，山东济南人，副教授，博士，主要从事蛋白质科学与结构生物学研究。E-mail：sujuan-xu@sdu.edu.cn
作者简介:刘秀华（1981-），女，河北泊头人，讲师，博士，主要从事蛋白质学研究。E-mail：xiuhualiu@hbu.edu.cn
基金资助:
保定市科学技术研究与发展指导计划项目(11ZF112)

Received:2011-12-03 Published:2012-03-15 Online:2012-03-15

摘要/Abstract

摘要： 弧菌素合成酶的A结构域在弧菌素的合成过程中发挥着重要作用。使用DNAStar软件对A结构域的蛋白质二级结构进行预测,截取了多组不同氨基酸长度的A结构域片段。使用PCR方法从霍乱弧菌N16961的基因组中克隆了A结构域基因,通过酶切、连接等方法将其构建到表达载体pET-21b(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。在30个不同氨基酸长度的A结构域蛋白片段中获得5个可溶性表达的片段;并且通过三步分离纯化的方法获得了一性状良好、均一和高纯度的A结构域蛋白(N861-1410),从而为A结构域蛋白质晶体生长提供了基础。

关键词: 霍乱弧菌, Ａ结构域, 克隆, 表达, 纯化

刘秀华，王执，徐素娟. 霍乱弧菌中弧菌素合成酶VibF的A结构域基因的克隆、表达与纯化研究[J]. 河南农业科学, 2012, 41(3): 149-153.

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