河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (1): 82-86.

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农杆菌介导尖孢镰刀菌西瓜专化型转化体系的建立及突变体筛选

梁慎1,常高正1,赵卫星1,杨丽荣2,孙虎2,李晓慧1,杨帆1,全鑫2,徐小利1*,薛保国2*   

  1. 1.河南省农业科学院 园艺研究所,河南 郑州 450002;2.河南省农业科学院 植物保护研究所,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2011-11-14 出版日期:2012-01-15 发布日期:2012-01-15
  • 通讯作者: 徐小利(1963-),男,河南汝南人,研究员,主要从事西甜瓜遗传育种研究。E-mail:xuxiaoli63@126.com 薛保国(1957-),男,河南驻马店人,研究员,博士,主要从事植物病理学、分子微生物学和基因工程的研究。E-mail:xuebbb@gmail.com
  • 作者简介:梁慎(1971-),男,河南鹿邑人,助理研究员,博士,主要从事分子植物病理学、生物化学与分子生物学研究。E-mail:liangshen1@126.com
  • 基金资助:
    国家西甜瓜产业技术体系专项经费资助项目(CARS-26-33)

  • Received:2011-11-14 Published:2012-01-15 Online:2012-01-15

摘要: 以尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)FO-11-06菌株为受体,采用农杆菌介导的遗传转化方法,实现了农杆菌AGL1(含pATMT1)介导的西瓜枯萎病菌的转化,并研究了转化介质和pH值对转化效率的影响。结果表明:在25℃下,采用乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L、农杆菌OD600=0.15、尖孢镰刀菌分生孢子含量为1×106个/mL、pH值为5.1~5.8时可实现T-DNA的插入转化。当转化体系pH值为5.3时,转化效率最高,达到每106个分生孢子产生553个转化子。不同共转化介质对转化效率影响明显,玻璃纸和硝酸纤维素滤膜转化效率较高,每106个分生孢子获得551个和549个转化子,显著高于滤纸。通过转化,获得尖孢镰刀菌西瓜专化型转化子1 989个,对生长速度、菌落颜色和产孢量等性状进行分析,发现有46个性状特异的突变体。研究结果为进一步研究尖孢镰刀菌西瓜专化型的生长发育、致病机制和相关基因的功能奠定了基础。

关键词: 尖孢镰刀菌西瓜专化型, 农杆菌, T-DNA插入转化, 转化效率