猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.06.018

河南农业科学 ›› 2020, Vol. 49 ›› Issue (6): 137-142.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.06.018

猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

冯华¹，刘晴坤^1，2，任春晓^1，2,刘运超¹，张改平^1，2

（1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002； 2.河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002)

收稿日期:2019-10-24 出版日期:2020-06-15 发布日期:2020-06-15
通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，中国工程院院士，博士，主要从事动物疫病免疫机制与疫苗研究。E-mail:zhanggaiping2003@163.com
作者简介:冯华（1983-），男，河南安阳人，助理研究员，博士，主要从事动物疫病及免疫学研究。
基金资助:
河南省重点研发与推广专项（182102110087）

Production and Characterization of PCV2b Epitope Chimeric Virus-like Particles Expressed in E.coli

FENG Hua¹,LIU Qingkun^1,2,REN Chunxiao^1,2,LIU Yunchao¹,ZHANG Gaiping^1,2

(1.Key Laboratory of Animal Immunology,Henan Academy of Agricultural Sciences/Henan Provincial Key Laboratory of Animal Immunology/Key Laboratory of Animal Immunology of Ministry of Agriculture,Zhengzhou 450002,China;2.College of Life Sciences,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China)

Received:2019-10-24 Published:2020-06-15 Online:2020-06-15

摘要/Abstract

摘要： 为了研究一种更为高效、廉价的猪圆环病毒2型（PCV2）亚单位疫苗，针对PCV2b型Cap基因核酸序列进行优化，将其编码中和表位226LKDPPLNP233的基因序列连接于Cap基因C端（Capc），并插入PE-Sumo载体，借助大肠杆菌表达系统对Capc蛋白进行表达；利用SDS-PAGE、Western blot、动态光散射和透射电镜观察等手段,对纯化后的目的蛋白活性及其形成的结构进行初步鉴定。结果显示，嵌合Capc基因片段成功插入PE-Sumo载体，并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中； Sumo-Capc重组蛋白在26 ℃下诱导12 h能够以可溶形式大量表达；经纯化的Capc蛋白能够与PCV2单克隆抗体特异结合，并能够自组装形成直径约为18 nm的病毒样颗粒。综上，成功构建了能够表达PCV2b型中和表位嵌合Cap的大肠杆菌表达系统，纯化得到的Capc蛋白具有良好的免疫反应性，且能够自组装成病毒样颗粒。

关键词: 猪圆环病毒2型, 中和表位, Cap蛋白, 病毒样颗粒, 候选疫苗

Abstract: To develop a high efficient and economic PCV2b subunit vaccine,the codons of PCV2 Cap gene were optimized for E.coli expression system,and the gene sequence of PCV2 neutralizing epitope ²²⁶LKDPPLNP²³³was conjugated at its C-terminus(Capc).After the recombinant sequence was constructed on PE-Sumo vector,recombinant chimeric Capc was expressed in E.coli.By using SDS-PAGE,Western blot,Dynamic light scattering and TEM,the immune reactivity and the structure of Capc protein were preliminarily identified.The results showed PE-Sumo-Capc vector was successfully constructed and transferred into E.coli BL21(DE3);Sumo-Capc protein was mostly expressed in soluble form after 12 h induction under 26℃ .The final purified Capc protein was able to specifically react with PCV2 Cap monoclonal antibody,and self-assembly into virus-like particles with the diameter around 18 nm.The current study successfully constructed an E.coli expression system for PCV2b neutralizing epitope chimeric Cap protein,which showed a good immunogenic reactivity and could self-assembly into virus-like particles.

Key words: Porcine circovirus type 2, Neutralizing epitope, Cap protein, Virus-like particle, Candidate vaccine

中图分类号:

S858.28

冯华, 刘晴坤, 任春晓, 刘运超, 张改平. 猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定[J]. 河南农业科学, 2020, 49(6): 137-142.

FENG Hua, LIU Qingkun, REN Chunxiao, LIU Yunchao, ZHANG Gaiping. Production and Characterization of PCV2b Epitope Chimeric Virus-like Particles Expressed in E.coli[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2020, 49(6): 137-142.

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猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

Production and Characterization of PCV2b Epitope Chimeric Virus-like Particles Expressed in E.coli

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