耐恩诺沙星沙门菌gyrA和gyrB基因的分子特征分析

摘要/Abstract

摘要： 为了探究临床分离的沙门菌对恩诺沙星的耐药机制，通过微量肉汤稀释法测定18株临床分离的沙门菌对恩诺沙星的敏感性，然后选取其中对恩诺沙星耐药的菌株，利用PCR扩增其gyrA和gyrB基因，并将扩增产物进行序列测定，最后用DNAMAN软件将测序结果与NCBI上公布的沙门菌标准野生型菌株（LT2）的gyrA和gyrB基因序列进行比对分析。结果显示，18株临床分离的沙门菌中有4株为耐药菌株，耐药率22.2％。对4株耐药菌株的gyrA和gyrB基因比对分析发现，gyrB基因未见突变，而gyrA基因有3个氨基酸位点突变，分别是Ser83→Phe或Leu（突变率100％）、Asp87→Asn（突变率75％）、Asn200→Asp（突变率25％）；其中恩诺沙星最小抑菌浓度（MIC）≥16.000 μg/mL的3株菌均是在83、87位出现双突变，而恩诺沙星MIC为4.000 μg/mL〖JP〗的1株菌则是在83、200位出现双突变。结果表明，沙门菌对恩诺沙星产生耐药性与gyrA基因的突变密切相关，gyrA基因喹诺酮耐药区（QRDR）的双突变可使沙门菌对恩诺沙星的耐药性增强，提示Asp87的突变可能增强了Ser83位点突变所介导的耐药性，但非QRDR区的Asn200不能发挥增强耐药性的作用。

关键词: 沙门菌, 恩诺沙星, 耐药性, gyrA基因, gyrB基因

黄慧，李荣誉，樊国燕，裴亚玲，王晓琳，娄飞. 耐恩诺沙星沙门菌gyrA和gyrB基因的分子特征分析[J]. 河南农业科学, 2019, 48(2): 150-153.

参考文献

参考文献:

［1］潘渭涓,陈祥,王晓泉,等.1993—2008年禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物耐药性分析［J］.中国人兽共患病学报,2009,25(7):630-635.

［2］廖成水,程相朝,吴庭才,等.河南省鸡源沙门氏菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析［C］//中国畜牧兽医学会动物微生态学分会.第四届第十次全国学术研会暨动物微生态企业发展论坛论文集（上册）:2010年卷.沧州:［出版社不详］,2010:502-506.

［3］顾兵,秦婷婷.沙门菌感染流行病学及对喹诺酮耐药研究进展［J］.传染病信息,2017,30(5):282-285.

［4］GRIGGS D J,GENSBERG K,PIDDOCK L J.Mutations in gyrAgene of quinoloneresistant Salmonella serotypes isolated from humans and animals［J］.Antimicrob Agents Chemother,1996,40(4):1009-1013.

［5］陈晶,孙自镛.鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类耐药机制的研究［J］.中国感染与化疗杂志,2006,6(2):100-104.

［6］谭炳乾,王红宁,叶如俊,等.PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变的研究［J］.湖北农业科学,2003(5):88-90.

［7］邓均华,徐涤平,伍锐,等.动物沙门氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药性及GyrA基因的突变研究［J］.湖南农业科学,2009,48(7):1554-1557.

［8］MERINO L A,ALONSO J M,RUIZ J,et al.Resistance to quinolones in Salmonella infantis due to overexpression of an active efflux system and a mutation in the gyrAgene［J］.Enferm Infecc Microbiol Clin,2007,25(5):357-358.

［9］CLSI.Performance standards for antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolated from animals,approvedfourth edition,CLSI document VET01A4［S］.USA:Clinical and Laboratory Standards Institute,2013.

［10］顾兵,秦婷婷.沙门菌感染流行病学及对喹诺酮耐药研究进展［J］.传染病信息,2017,30(5):282-285.

［11］闫东辉,许淑珍,苏建荣,等.肠球菌gyrA基因突变和多重耐药泵与氟喹诺酮耐药性关系研究［J］.首都医科大学学报,2012,33(2):161-164.

［12］JOHNNING A,KRISTIANSSON E,FICK J,et al.Resistance mutations in gyrA and parCare common in Escherichia communities of both fluoroquinolone polluted and uncontaminated aquatic environments［J］.Front Microbiol,2015(6):1355.

［13］王忠永,郑佳音,潘钦石.环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌喹诺酮耐药决定区基因突变分布特征［J］.浙江实用医学,2010,15(6):469-471.

［14］谭炳乾,王红宁,叶如俊,等.PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变的研究［J］.湖北农业科学,2003(5):88-90.

［15］PIDDOCK L J.Mechanisms of fluoroquinolone resistance:An update 1994—1998［J］.Drugs,1999,58(2):11-18.

［16］杨辉,张国良,张明霞.结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药与gyrA基因突变的关系［J］.实用医学杂志,2012,28(20):3457-3459.

［17］TAMANG M D,NAM H M,CHAE M H,et al.Prevalence of plasmidmediated quinolone resistance determinants amongEscherichia coli isolated from food animals in Korea［J］.Food Pathog Dis,2012,9(12):1057-1063.

［18］DE LA FUENTE C M,DAUROS S P,BELLO T H,et al.Mutations in gyrA and gyrB genes among strains of Gramnegative bacilli isolated from Chilean hospitals and their relation with resistance to fluoroquinolones［J］.Revista Médica De Chile,2007,135(9):1103-1110.

［19］张国栋,曾章锐,王莹,等.gyrA、gyrB和外派系统共同介导铜绿假单胞菌对喹诺酮类耐药机制的研究［J］.中国感染与化疗杂志,2014,14(3):224-228.

［20］李珂婷.不同（氟）喹诺酮类抗生素作用沙门氏菌时菌株变异规律［D］.杨凌：西北农林科技大学,2016.

[1]	彭志锋, 黄慧, 张晓战, 蒋增海, 史洪涛, 乔宏兴, 边传周. 猪胸膜肺炎放线杆菌河南株的分离鉴定与药物敏感性分析[J]. 河南农业科学, 2021, 50(1): 158-163.
[2]	崔小蝶, 易开放, 杨影影, 贺丹丹, 吴华, 苑丽, 胡功政. 外排泵抑制剂CCCP对不同耐药机制介导的沙门菌黏菌素耐药性的逆转作用[J]. 河南农业科学, 2020, 49(12): 124-129.
[3]	张明亮，张淼丹，闫新武，孙长江，顾敬敏，崔子寅，韩文瑜. 貂源铜绿假单胞菌耐药性及生物学特性[J]. 河南农业科学, 2019, 48(5): 122-129.
[4]	马帅，乔军，孟庆玲，伍晔晖，王熙凤，郭晶，蔡扩军，王登峰，才学鹏. 新疆奶牛子宫内膜炎大肠杆菌进化分群及耐药特性研究[J]. 河南农业科学, 2018, 47(7): 116-123.
[5]	赵凤菊，曹东，李井春，魏澍. 猪源大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析[J]. 河南农业科学, 2017, 46(2): 111-115.
[6]	毛福超，郁川，韩璐，韩于佩，刘文慧，刘静. 豫西地区禽源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 河南农业科学, 2016, 45(1): 127-130.
[7]	张彬，韩志霞，马金玉，王雪云，许兰菊，李克宇. 河南省部分地区大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究[J]. 河南农业科学, 2015, 44(2): 127-131.
[8]	王克领，张青娴，徐引弟，郎利敏，张立宪，李海利，朱文豪，游一，郑万录. 河南地区猪源性大肠杆菌血清型鉴定与耐药性调查[J]. 河南农业科学, 2014, 43(9): 164-167.
[9]	石玉祥，王绥华，张永英，栾英范，玄家洁，甄龙. 规模化鸡场空气致病性大肠杆菌的分离鉴定及其耐药性观察[J]. 河南农业科学, 2014, 43(2): 126-128.
[10]	钱明珠, 王申锋, 李　冉. 开封地区鸡大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 河南农业科学, 2011, 40(10): 137-140.
[11]	李世民;沈海龙;刘迪;许春生;李玉祥. 盛蕾期转基因抗草甘膦棉花对草甘膦的抗性研究[J]. 河南农业科学, 2010, 39(10): 46-48.
[12]	樊国燕;臧金灿;边传周. 规模化猪场大肠杆菌的分离鉴定及耐药性监测[J]. 河南农业科学, 2008, 37(3): 110-112.
[13]	赵银丽;滕蔓;邓瑞广;柴书军;刘庆堂;张改平. 恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性[J]. 河南农业科学, 2008, 37(10): 121-124.
[14]	吴志明;段建成;周全玲. 河南省畜禽几种主要致病菌的分离鉴定和耐药性检测[J]. 河南农业科学, 2006, 35(1): 97-99103.
[15]	陈陆;王川庆;王江辉;刘红英;常洪涛. 河南省致病性猪链球菌耐药性监测报告[J]. 河南农业科学, 2005, 34(3): 74-75.