亚型猪流感病毒3种谱系三重RT-PCR检测方法的建立与应用

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (6): 122-126.

亚型猪流感病毒3种谱系三重RT-PCR检测方法的建立与应用

兰德松^1,2,3,4，魏澍^3,4，侯振中^1,2*

（1．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150030； 2．农业部动物疫病病原生物学重点实验室，黑龙江哈尔滨  150030； 3．辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110164； 4．辽宁省动物医学研究院，辽宁沈阳 110164）

收稿日期:2018-01-15 出版日期:2018-06-15 发布日期:2018-06-15
通讯作者: 侯振中(1963-)，男，黑龙江宾县人，教授，主要从事家畜预防诊治技术研究。E-mail:houzz_1963@163.com
作者简介:兰德松（1982-），男，湖北洪湖人，高级兽医师，在读博士研究生，研究方向：动物疫病防控与诊断技术。E-mail:landesong@163.com
基金资助:
辽宁省自然科学基金指导计划项目（20170540478）；辽宁省科学事业公益研究基金项目（2014001012）；辽宁省“百千万人才工程”人选项目（2014921026）

Received:2018-01-15 Published:2018-06-15 Online:2018-06-15

摘要/Abstract

摘要： 以H1N1亚型猪流感病毒（SIV）3种主要谱系2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）、古典型H1N1（CS H1N1）和类禽型H1N1（aH1N1）的血凝素（Hemagglution，HA）基因为靶基因，设计3对特异性引物，建立一种可以同时检测一个反应体系中H1N1亚型3种主要谱系SIV的三重RT-PCR方法，并将其应用于临床样品的检测，旨在为开展猪群中流行的H1N1亚型SIV感染及流行情况的调查研究提供有力技术支撑。结果显示，该方法可对pdm/09 H1N1、CS H1N1和aH1N1这3个不同谱系SIV特异性检出，扩增片段大小分别为476 bp、293 bp和997 bp，而与其他病毒无交叉反应；最低检测限分别为1 460拷贝/μL、1 700拷贝/μL和1 950拷贝/μL；应用到3 110份临床样品检测中，检测出10株pdm/09 H1N1和21株aH1N1 SIV，未检测到CS H1N1 SIV，与鸡胚分离病毒符合率达100%。综上，该方法敏感性和特异性良好，能快速、有效实现对临床样品中H1N1亚型3种谱系的检测。

关键词: 猪流感病毒, 2009甲型H1N1, 古典型H1N1, 类禽型H1N1, 三重RT-PCR

兰德松，魏澍，侯振中. 亚型猪流感病毒3种谱系三重RT-PCR检测方法的建立与应用[J]. 河南农业科学, 2018, 47(6): 122-126.

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