河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (2): 119-124.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.02.023

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肝片吸虫Ftn-1蛋白分子特征、抗原性及其抗体制备

王熙凤,孟庆玲,乔 军,陈 英,钟文强,贡莎莎,黄运福,才学鹏   

  1. 1. 石河子大学 动物科技学院,新疆 石河子 832003; 2. 中国农业科学院 兰州兽医研究所,甘肃 兰州 730046
  • 收稿日期:2017-08-22 出版日期:2018-02-15 发布日期:2018-02-15
  • 通讯作者: 孟庆玲(1969-),女,江苏徐州人,博士,教授,主要从事动物寄生虫学研究。E-mail:xjmqlqj@163.com
  • 作者简介:王熙凤(1994-),女,新疆吐鲁番人,在读硕士研究生,研究方向:动物寄生虫学。E-mail: 1510552283@qq.com
  • 基金资助:
    国家十三五重点研发计划项目(2017YFD0501200); 国家公益性农业行业专项( 201303037-5)

  • Received:2017-08-22 Published:2018-02-15 Online:2018-02-15

摘要: 为研究肝片吸虫Ftn-1蛋白的免疫学特性,本试验根据Genbank中已发表的Ftn-1基因序列设计特异性引物,以肝片吸虫总RNA为模板,进行Ftn-1基因的RT-PCR扩增,扩增产物连接到pMD19-T载体中,筛选出阳性克隆后测序,分析其分子特征。将Ftn-1基因克隆入表达载体pET-32a(+)中,将其转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达并获得纯化的重组蛋白Ftn-1,经SDS-PAGE检测后,进行Western blot和小鼠免疫试验,进行抗原性分析。结果显示,成功克隆了肝片吸虫Ftn-1基因,其cDNA全长为477 bp,推测编码158个氨基酸,编码蛋白质分子的抗原表位区主要集中在第33—57、83—87、113—146位,为亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽。经SDS-PAGE 检测,重组蛋白Ftn-1分子质量约为33.5 ku,与预期大小相符;Western blot分析表明,重组蛋白Ftn-1可被肝片吸虫阳性血清特异性识别,证明具有良好的反应原性。小鼠免疫试验证实,重组蛋白Ftn-1具有良好的免疫原性。

关键词: 肝片吸虫, 铁蛋白样蛋白, 分子特征, 抗原性

中图分类号: