河南农业科学 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (8): 131-136.

• 畜牧·兽医 • 上一篇    下一篇

1株猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

李晓楠1,唐青海1,2*,李 羽1,王 瑾1,姚伦广1,阚云超1,杨 海2
  

  1. 1.南阳师范学院 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/昆虫生物反应器河南省工程实验室,河南南阳 473061;2.衡阳师范学院 生命科学与环境学院/生物药物研究所,湖南 衡阳 421008
  • 收稿日期:2016-12-02 出版日期:2017-08-15 发布日期:2017-08-15
  • 通讯作者: 唐青海(1982-),男,湖南祁阳人,讲师,博士,主要从事生物制药与疫苗工程研究。E-mail:qinghaitang109@126.com
  • 作者简介:李晓楠(1989-),女,河南南阳人,在读硕士研究生,研究方向:生物制药与疫苗工程。E-mail:929016862@qq.com
  • 基金资助:
    河南省重点科技攻关项目(142102110101);河南省高等学校重点科研项目(16A230023);南阳师范学院研究生创新基金项目(2016CX008);衡阳师范学院引进人才专项(16D20)

  • Received:2016-12-02 Published:2017-08-15 Online:2017-08-15

摘要:

采集1例疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)仔猪的粪便,运用RT-PCR方法和血清学方法对病料进行TGEV检测,并应用猪睾丸细胞(ST)进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和RT-PCR方法检测病毒在ST细胞中的增殖动态,应用RT-PCR方法扩增分离TGEV S1基因,经序列测定后,采用DNAStar 7.0和Mega 5.0软件对TGEV进行生物信息学分析。结果表明,病料接种到ST细胞培养后,出现明显细胞病变效应(CPE);RT-PCR检测结果显示,TGEV核酸阳性;血清学鉴定TGEV抗原阳性。将分离毒株命名为TGEV-NY。感染12 h后,IPMA检测结果阳性,且可从细胞培养上清中检出TGEV核酸。序列测定分析表明,分离毒株S1基因开放阅读框(ORF)为2 220 bp,编码740个氨基酸。进化分析显示,分离毒株与我国2006年分离的SC-Y毒株亲缘关系最近,分离毒株属于基因Ⅰ群。

关键词: 猪传染性胃肠炎病毒, 分离培养, 免疫过氧化物酶单层细胞染色法