河南农业科学 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (11): 116-121,125.

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1株耐高温产蛋白酶细菌的筛选鉴定及其液体发酵条件的优化

敖 静,桓明辉,李 杨,刘晓辉,高晓梅,徐 冲   

  1. (辽宁省微生物科学研究院,辽宁 朝阳 122000)
  • 收稿日期:2016-05-01 出版日期:2016-11-15 发布日期:2016-11-15
  • 作者简介:敖 静(1986-)女,辽宁朝阳人,助理研究员,本科,主要从事微生物菌种选育工作。E-mail:aojing07@163.com

  • Received:2016-05-01 Published:2016-11-15 Online:2016-11-15

摘要: 为高效发酵鸡粪,在鸡粪发酵高温时期(≥50 ℃)筛选到11株菌株,确定其中1株高温细菌GX7具有较高的蛋白酶活力。经16S rDNA测序并进行同源性比较可知,GX7与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16S rDNA 序列相似性达到100%;通过构建系统发育进化树,结合生理生化试验,鉴定GX7为枯草芽孢杆菌。通过绘制细菌生长曲线、测定细菌蛋白酶活力可知,细菌GX7的蛋白酶活力与菌数呈强正相关。从发酵培养基的组成及菌株的培养条件等方面优化枯草芽孢杆菌GX7产蛋白酶的条件,结果显示,最优培养基配方为:酵母浸膏1.5%、玉米粉1.5%、MgSO4 0.5%;最优培养条件为:pH值8.1、培养温度37 ℃、接菌量2%、装液量50 mL(250 mL)、摇床转速140 r/min。在此条件下,活菌数提高1个数量级,达到2.56×109 cfu/mL,蛋白酶活力提高约3倍,为26 U/mL。

关键词: 耐高温, 蛋白酶, 细菌, 鉴定, 发酵条件优化