猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

河南农业科学 ›› 2019, Vol. 48 ›› Issue (8): 129-133.

猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

李鸽¹，刘肖¹，李青梅²，杨艳艳²，王彦红²，张改平^1,2,3

（1.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002； 2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002； 3.江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州 225009）

收稿日期:2019-03-22 出版日期:2019-08-15 发布日期:2019-08-15
通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，博士，中国工程院院士，主要从事动物免疫学研究。E-mail:zhanggaiping2003@163.com
作者简介:李鸽（1995-），女，河南新郑人，在读硕士研究生，研究方向：流感快速检测技术。E-mail:leegehz@126.com
基金资助:
国家重点研发计划项目（2016YFD0500701）

Received:2019-03-22 Published:2019-08-15 Online:2019-08-15

摘要/Abstract

摘要： 为了制备猪流感病毒（SIV）核蛋白（NP）的单克隆抗体（MAb），采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞，分别命名为16D5、18G8和20C4，将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10^-6、1×10^-6和1×10^-5。亚型鉴定结果显示，3株单克隆抗体的重链均为IgG1，轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒，并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Western blot检测结果表明，3株杂交瘤细胞培养上清均在56 ku附近出现一条特异性的蛋白质条带，说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上，成功制备了针对SIV NP蛋白的3株单克隆抗体，可识别不同亚型的SIV。

李鸽，刘肖，李青梅，杨艳艳，王彦红，张改平. 猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 河南农业科学, 2019, 48(8): 129-133.

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