黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达

摘要/Abstract

摘要： 为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制，以黏虫为试验材料，利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因Mswly的全长序列，同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达。克隆、测序后分析表明，Mswly基因的cDNA全长为652 bp(GenBank登录号为MG692501)，开放阅读框序列长度为426 bp，编码141个氨基酸。其编码蛋白质分子质量为16.26 ku，理论等电点为6.57；含有信号肽，剪切位点在第20个和21个氨基酸之间；含有溶菌酶活性所需要的谷氨酸和天冬氨酸活性位点。系统进化树分析表明，Mswly与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起，说明Mswly为C型溶菌酶。Western blotting 结果显示，Mswly重组蛋白大小约17 ku，与预期分子质量大小一致，说明Mswly基因在昆虫Sf9细胞系能够高效表达。综上，从黏虫脂肪体中克隆得到了1个C型溶菌酶基因Mswly的完整cDNA序列，并将其在草地贪夜蛾细胞系Sf9中进行了高效表达。

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