稳定表达猪δ 冠状病毒S1 蛋白CHO细胞系的构建与鉴定

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.06.014

河南农业科学 ›› 2023, Vol. 52 ›› Issue (6): 131-138.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.06.014

稳定表达猪δ 冠状病毒S1 蛋白CHO细胞系的构建与鉴定

孙雪珂^1,2，丁培阳³，王思桥^1,2，刘思源²，李明慧²，常泽杰²，陈艺兰²，李瑞琪²，张改平^1,2,4

（1.河南农业大学生命科学学院，河南郑州 450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002；3.郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001；4.江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州 225009）

收稿日期:2023-01-14 出版日期:2023-06-15 发布日期:2023-07-11
通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，博士，主要从事重大疫病快速检测技术与疫苗研究。E-mail：zhanggaiping2003@126.com
作者简介:孙雪珂（1997-），女，河南新乡人，在读硕士研究生，研究方向：动物免疫学。E-mail：15560279563@163.com
基金资助:
河南省重大科技专项（221100110600）

Establishment and Identification of CHO Cell Line Stably Expressing S1 Protein of PDCoV

SUN Xueke^1,2，DING Peiyang³，WANG Siqiao^1,2，LIU Siyuan²，LI Minghui²，CHANG Zejie²，CHEN Yilan2，LI Ruiqi2，ZHANG Gaiping^1,2

（1.College of Life Sciences，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2.Key Laboratory of Animal Immunology，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China；3.College of Life Sciences，Zhengzhou University，Zhengzhou 450001，China；4.Jiangsu Co⁃innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses，Yangzhou 225009，China）

Received:2023-01-14 Published:2023-06-15 Online:2023-07-11

摘要/Abstract

摘要： 为构建稳定表达猪δ 冠状病毒（PDCoV）S1 蛋白的CHO 细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1 转染至CHO细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠，通过间接ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。

关键词: 猪δ冠状病毒, S1蛋白, CHO细胞, 稳定表达, 蛋白质纯化

Abstract: To construct a CHO cell line stably expressing porcine deltacoronavirus（PDCoV）S1 protein，the recombinant plasmid pCGS3⁃S1 was electroporated into CHO cells，and monoclonal cell lines stably expressing recombinant S1 protein were screened by limited dilution method.The recombinant S1 protein was purified by anion exchange chromatography and gel filtration chromatography，and its activity was detected by indirect ELISA.BALB/c mice were immunized with the purified recombinant S1 protein，and the immunogenicity of the recombinant S1 protein was detected by indirect ELISA，indirect immunofluorescence assay（IFA）and virus neutralization test. The results showed that the CHO cell line stably expressing PDCoV S1 protein was successfully established，and the recombinant S1 protein with purity higher than 90% and yield of 28.5 mg/L was obtained. Moreover，the recombinant S1 protein had good reactivity with PDCoV positive serum，and had good immunogenicity，with the neutralization titer of 1∶128.To sum up，a CHO cell line stably expressing PDCoV S1 protein is successfully established，and the purified recombinant S1 protein has good biological activity.

Key words: PDCoV, S1 protein, CHO cells, Stable expression, Protein purification

中图分类号:

S855.3

孙雪珂, 丁培阳, 王思桥, 刘思源, 李明慧, 常泽杰, 陈艺兰, 李瑞琪, 张改平. 稳定表达猪δ 冠状病毒S1 蛋白CHO细胞系的构建与鉴定[J]. 河南农业科学, 2023, 52(6): 131-138.

SUN Xueke, DING Peiyang, WANG Siqiao, LIU Siyuan, LI Minghui, CHANG Zejie, CHEN Yilan, LI Ruiqi, ZHANG Gaiping. Establishment and Identification of CHO Cell Line Stably Expressing S1 Protein of PDCoV[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2023, 52(6): 131-138.

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稳定表达猪δ 冠状病毒S1 蛋白CHO细胞系的构建与鉴定

Establishment and Identification of CHO Cell Line Stably Expressing S1 Protein of PDCoV

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