摘要： 为建立低成本、快速、高效的根癌农杆菌介导的致病疫霉转化体系,以菌株HK09-19为材料,从抗生素筛选浓度、共培养转膜方式、乙酰丁香酮(AS)浓度、共培养时间和共培养温度等方面对致病疫霉的转化体系进行了研究。综合各因素优化结果,建立的转化体系条件为:以1.0 μg/mL的潮霉素B进行转化子筛选,采用玻璃纸作为共培养介质,AS浓度为200 μmol/L,培养6d,温度为22℃。在此条件下的转化效率为每106个游动孢子获得50~60个转化子。随机选取10个转化子,利用特异性引物对潮霉素抗性基因hph进行PCR扩增,转化子均能扩增出800bp左右的预期条带;同时,利用根癌农杆菌vir基因特异引物对转化子进行PCR扩增,排除了转化子被农杆菌污染所致的假阳性;转化子继代培养5代后,仍能在含潮霉素B的黑麦培养基上生长。说明外源T-DNA已成功整合到致病疫霉基因组中,并能稳定遗传。

关键词: 致病疫霉, 根癌农杆菌介导的转化, T-DNA, 转化效率